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．實驗原理聚合酶鏈式反應（Polymerasechainreaction）簡稱PCR，它是一種DNA體外擴增技術。1985年美國的Mullis等人發明了PCR技術，在體外利用模板DNA、特定的寡聚核苷...
1、引物設計細心地進行引物設計是PCR中zui重要的一步。理想的引物對只同目的序列兩側的單一序列而非其他序列退火。設計糟糕的引物可能會同擴增其他的非目的序列。下面的指導描述了一個可以增加特異性的引物所...
RNA干擾(RNAinterference，RNAi)是正常生物體內抑制特定基因表達的一種現象，它是指當細胞中導入與內源性mRNA編碼區同源的雙鏈RNA(doublestrandedRNA，dsRNA...
所謂亞克隆就是對已經獲得的目的dna片段進行重新克隆，其目的在于對目的DNA進行進一步分析，或者進行重組改造等。亞克隆的基本過程包括：(1)目的DNA片段和載體的制備；(2)目的DNA片段和載體的連接...
平端連接通常情況下，PCR產物可直接與平端載體DNA進行連接，但其連接效率效低。因為TaqDNA聚合酶具有非模板依賴性末端轉移酶活性，能在兩6條DNA鏈的3"末端加上一個多余的堿基，使合成的PCR產物...
生物界的豐富多彩很大程度上取決于嚴格調控下的基因的選擇性表達。高等生物的細胞內約含有105個不同的基因，而主基因在某個特定的細胞中，只有占15％的一小部分表達。而且在不同的細胞中，選擇性表達的基礎也是...
PCR技術必須有人工合成的合理引物和提取的樣品DNA，然后才進行自動熱循環，zui后進行產物鑒定與分析。引物設計與合成目前只能在少數技術力量較強的研究院、所進行，臨床應用只需購買pcr檢測試劑盒就可開...
zui常用的基因分離方法需要建立組織或細胞RNA的cDNA庫，然后用抗體或DNA探針篩選出感興趣的基因。雖然這個方法已成功地克隆了大量基因，但建立和篩選CDNA庫是一項非常耗時．費力的工作，而且用寡聚...
Chapter4replicationDNAreplicationDNAdamageａndrepairReversetranscriptionRNAreplicationDNA復制的基本特點半保留復制...
一、材料與方法1.EDTA（無蛋白酶抑制劑）（Roche）2.酸沖洗過的425-600玻璃珠（Sigma）3.洋地黃皂苷（digitonin）（EMDChemicals）4.蛋白酶抑制劑（DMSO,亮...
又名匹拉米洞，Pyramidon,Amidozon,Aminophenazon,Aminopyrine，由氨基經催化氫化（烴化）而得，解熱鎮痛作用較強，緩慢而持久，消炎抗風濕作用與相似。本品因能引起骨...
目前常用比色法測定樣品蛋白的含量：Bradford法（考馬斯亮藍法）、Lowry法（Folin-酚試劑法）、BCA法等。但各有優缺點，大家可以根據具體情況選取。按相應蛋白質定量試劑盒操作說明操作，測定...
一、實驗原理變性梯度凝膠電泳（DGGE）是一種根據DNA片段的熔解性質而使之分離的凝膠系統。核酸的雙螺旋結構在一定條件下可以解鏈，稱之為變性。核酸50%發生變性時的溫度稱為熔解溫度（Tm）。Tm值主要...
蛋白測定是在生命科學研究中zui廣泛應用的方法之一。在蛋白提純，電泳，免疫分析，細胞生物，分子生物和其他研究應用時評估蛋白濃度是必需的。雖然目前有各種不同的蛋白測定方法，但仍然還沒有一種測定方法被認為...
一、Bradford法該方法用于大多數蛋白質定量是相當的，特別是用于小分子多肽定量。如核糖核酸酶或等。但是，去污劑的濃度超過0.2%則影響定量結果。如TritonX-100，SDS，NP-40等。1....
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