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技術中�

*SD大鼠一氧化氮酶聯免疫分析試劑盒使用說明�

2017�02�24� 09:07:50人氣�283來源�上海酶聯生物研究所

資料類型doc文件資料大小89600
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� � �上海酶聯生物研究所 需要積�0
� � �SD大鼠一氧化氮酶聯免疫分析試劑盒
【資料簡介�

本試劑盒僅供研究使用�
SD大鼠一氧化氮酶聯免疫分析試劑盒檢測范圍�96T
1μmol/L -40μmol/L

使用目的�
本試劑盒用于測定SD大鼠血清樣本中一氧化氮(NO)含��
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中SD大鼠一氧化氮(NO)水平。用純化的SD大鼠一氧化氮(NO)抗體包被微孔板,制成固相抗�,往包被單抗的微孔中依次加入一氧化氮(NO),再與HRP標記的一氧化氮(NO)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合�,經�*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的一氧化氮(NO)呈正相�。用酶標儀�450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中SD大鼠一氧化氮(NO)濃度� 
試劑盒組� 

SD大鼠一氧化氮酶聯免疫分析試劑盒標本要求 
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放�-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣�,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活��
操作步驟
1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一�,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋�


2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加�50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品zui終稀釋度�5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混��
3.溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘�   
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�5�,拍��
6.加酶:每孔加入酶標試�50μl,空白孔除外� 
7.溫育:操作同3�
8.洗滌:操作同5�
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混��37℃避光顯�10分鐘.
10.終止:每孔加終止�50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色��
11.測定:以空白空調��450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)� 測定應在加終止液�15分鐘以內進行�
操作程序總結�


計算
  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐�,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃�;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度� 
注意事項
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使�,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保��
2.濃洗滌液可能會有結晶析�,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果�
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確�,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘�,如標本數量多,*使用排槍加樣�
4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品�*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數�×n×5)�
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污��
6.底物請避光保存�
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為�.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理�
9.本試劑不同批號組分不得混用�
SD大鼠一氧化氮酶聯免疫分析試劑盒保存條件及有效期
1.試劑盒保存��2-8℃�
2.有效期�6個月

上海酶聯生物研究所作�

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