基于特異性抗體的沙門菌病免疫學檢測方法

2010年12月03日 09:54:39人氣：1583來源：上海銳谷生物科技有限公司

隨著抗體制備技術的不斷進步，特別淋巴細胞雜交瘤技術的出現，使得研究人員能夠制備出高品質的抗沙門菌菌體或鞭毛抗原的屬特異性抗體，用以建立一些快速的檢測方法。已建立的沙門菌免疫學檢測方法有許多種，大致可分為以酶聯免疫吸附試驗、免疫熒光試驗、放射免疫試驗為基礎的方法及其他多種以抗體為基礎，利用乳膠凝集、免疫傳感器、免疫擴散及免疫色譜技術的方法。

（1）免疫酶技術在實踐中，ELISA作為一種沙門菌檢測的高敏感性檢測技術，由于其安全性、簡便性等方面的優點，使其在臨床檢驗以及科研中被廣泛應用。

文其乙等應用王志亮研制的沙門菌屬特異性單抗CB8和de7建立了檢測沙門菌的直接ELISA方法，即用被檢樣品直接包被酶標板，固定后加酶標屬特異性單抗，作用一定時間后，加入底物呈色后終止反應。目前已成功地應用于蛋品、鮮奶、肉晶中沙門菌的檢測，該方法與傳統方法相比，敏感性和特異性均達到理想效果。

抗原捕獲ELISA是用特異性的單克隆抗體包被酶標板，加人待檢樣品，是樣品中的抗原捕獲抗體的基礎上發展起來的一種新的檢測技術。Riad等用此方法對66份牛糞樣品進行鼠傷寒沙門菌檢測，被檢樣品中24．2％為陽性，與直接ELISA方法19．7％的陽性檢出率相比，更加靈敏。

目前，國外開發出一種沙門菌自動酶標免疫檢測儀，其原理是用酶熒光分析技術通過固相吸附器，用已知抗體捕捉目標生物體，然后以帶熒光的酶聯抗體再次結合，經充分沖洗后，通過激發光源檢測，即能自動讀出發光的陽性標本，其對沙門菌的檢測的結果比較穩定，已先后被美國FDA、AOAC、USDA等部門認可。

（2）免疫熒光技術用于快速檢測細菌的熒光抗體技術主要有直接法和間接法。直接法是在檢測樣品上直接滴加已知特異性熒光標記的抗血清，經洗滌后在熒光顯微鏡下觀察結果。間接法是在檢樣上滴加已知的細菌特異性抗體，作用后經洗滌，再加入熒光標記的第二抗體。

孫洋等利用吖啶橙標記沙門菌屬特異性抗血清，用吖啶橙免疫熒光菌團培養法檢測沙門菌，證明該檢測方法與枯草桿菌、大腸埃希桿菌等八種雜菌均不形成菌團交叉，與雜菌的濃度比在1：640內均不受干擾，在30h內即可獲得結果。縮短了檢測時間，而且具有敏感性高、特異性強、簡便快速等優點。Cloak等將待檢樣品吸附于玻璃斜面的一種薄膜上，然后用免疫熒光顯微鏡進行結果判定，該方法可檢測到1Xl0³個／ml。

（3）免疫膠體金技術免疫金滲濾法是20世紀90年代初期發展起來的以膠體金為標記物的簡便、快速的檢測方法，它綜合了膠體金自身顯色、與蛋白質物理吸附而不影響吸附分子的生物活性、性質穩定等一系列優點，以硝酸纖維素膜為載體，利用微孔濾膜的可濾過性使抗原—抗體反應和洗滌在這一特殊的滲濾裝置上以液體滲濾過膜的方式，迅速完成，簡化了操作步驟，縮短了檢測的時間。

曹春梅等利用針對沙門菌09抗原單克隆抗體和膠體金標記親和純化的羊抗鼠IgG，建立了一種以微孔濾膜為固相載體，快速檢測沙門菌09抗原的斑點免疫金滲濾法。沙門菌點膜，加入單抗，洗滌后再加入膠體金標記的羊抗鼠IgG，陽性結果呈紅色圓點，陰性結果無顏色整個檢測過程僅需10min。腸炎沙門菌標準菌株測定該方法靈敏度為6X10⁴CFU／點。該方法可檢測所有已知含09抗原的沙門菌，而不與其他沙門菌、腸桿菌科其他細菌和常見革蘭陽性細菌反應。

（4）免疫色譜技術的沙門菌免疫學快速檢測，利用經特異性抗體敏化的免疫色譜卡片為基礎。幾滴樣品加到卡片上，結果可以直接用肉眼讀出。免疫色譜卡片極易操作，且由于不需要特殊設備，很適合小型實驗室使用。盡管卡片檢測法與·ELISA法一樣需要對樣品進行增菌處理，但卡片法檢測耗時不超過10rain。

（5）乳膠凝集技術將特異性的抗體包被在乳膠顆粒表面，通過抗體與相應的沙門菌抗原結合，產生肉眼可見的凝集反應。通常此法需獲得細菌的純培養物，再將培養物與致敏乳膠反應。目前FDA認可的產品有Bactigen、Spectate、Microscreen、Serobact等。

關鍵詞：傳感器熒光顯微鏡顯微鏡微孔濾膜

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