環保在線APP
環保在線手機站
環保在線小程序
微信公眾號
上海都宜生物科技有限公司作者
磷酸鈣法轉染HEK293T細胞
一.試劑配制
無菌水ddw： 高溫滅菌； 分裝；
2XHBS： 280mM NaCl
10mM KCl
1.5 mM Na2HPO4
12 mM glucose
50 mM HEPES
Adjust the pH , every 0.05pH from 7.00 to 7.45 using 10N NaOH, then add ddw. to the final volume. 過濾滅菌，分裝；
2M CaCl2： 過濾滅菌，分裝。
二. 實驗過程：
1. 鋪細胞： 選擇狀態良好的293T細胞傳代， 2-3x105個細胞/35mm dish。
2. 20-24h后，待細胞長至鋪滿瓶底約50-70%的時候，進行轉染。下面就35mm dish為例，采用以下轉染體系：
ddw： 105ul
plasmid： 2 ug （如0.5ug/ul， 即用4ul）
2M CaCl2： 16.5ul
2XHBS： 125ul
按上述順序，往eppendorf管中依次加入上述四種試劑。
先將前三者混勻， zui后加2XHBS。
一種方法是，加2XHBS時要逐滴加入， 吹打至微現乳白色， 立即均勻滴入培養皿，輕輕搖勻后置于培養箱中，6-8h后換液。
另一種方法是， 加入2XHBS后立即吹打約40下（不過這個要根據每個人的力道和吹打的頻率而定， 建議做一個梯度實驗，吹打不同的次數看哪次的轉染效率高以后就按這個次數來吹打）， 之后步驟同上， 立即均勻滴入培養皿，輕輕搖勻后置于培養箱中，6-8h后換液。
關鍵詞：培養箱
上一篇：環形高壓鼓風機的定義及特點、用途
下一篇：簡要分析拉力機的保養方法
全年征稿/資訊合作
聯系郵箱：[email protected]
- 版權與免責聲明
- 1、凡本網注明"來源：環保在線"的所有作品，版權均屬于環保在線，轉載請必須注明環保在線，http://www.hezebar.com。違反者本網將追究相關法律責任。
- 2、企業發布的公司新聞、技術文章、資料下載等內容，如涉及侵權、違規遭投訴的，一律由發布企業自行承擔責任，本網有權刪除內容并追溯責任。
- 3、本網轉載并注明自其它來源的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網贊同其觀點或證實其內容的真實性，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時，必須保留本網注明的作品來源，并自負版權等法律責任。
- 4、如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發表之日起一周內與本網聯系，否則視為放棄相關權利。
產品推薦更多>>
-
-
型號：ZCHG-160 -
-
NPW150總磷/總氮在線分析儀工業廢水 總磷/總氮在線檢測儀
型號：NPW150總磷/總氮在線分析儀工業廢水 總磷/總氮在線檢測儀 -
型號：ZCHG-80 -
型號：ZCHG-80
環保在線官微
環保在線APP
環保在線小程序