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小鼠白細(xì)胞介�- 13(IL-13)ELISA試劑盒說明書

2016�11�11� 16:51:23人氣�132來源�南京海克爾生物科技有限公司

資料類型doc文件資料大小130560
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� � �南京海克爾生物科技有限公司 需要積�0
�(guān) � �小鼠白細(xì)胞介�- 13(IL-13)ELISA試劑盒說明書,小鼠白細(xì)胞介�- 13(IL-13�,�
【資料簡介�

小鼠白細(xì)胞介�- 13(IL-13�ELISA試劑

使用說明�

本試劑僅供研究使�       目的:本試劑盒用于測定小鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中小鼠白�(xì)胞介�- 13(IL-13)含量�

�(shí)�(yàn)原理

     本試劑盒�(yīng)用雙抗體夾心法測��(biāo)�小鼠白細(xì)胞介�- 13(IL-13�水平。用純化�小鼠白細(xì)胞介�- 13(IL-13�抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入IL-13,再與HRP�(biāo)記的IL-13抗體�(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體�(fù)合物,經(jīng)�*洗滌�底物TMB顯色。TMB�HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成�(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中�IL-13呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀�450nm波長下測定吸光度(OD值)�通過�(biāo)�(zhǔn)曲線�(jì)算樣�中小鼠白�(xì)胞介�- 13(IL-13�濃度�

試劑盒組�

試劑盒組�

      48孔配�

96孔配�

保存

說明�

1�

1�

 

封板�

2片(48�

2片(96�

 

密封�

1�(gè)

1�(gè)

 

酶標(biāo)包被�

1×48

1×96

2-8℃保�

�(biāo)�(zhǔn)品:72ng/L

0.5ml×1�

0.5ml×1�

2-8℃保�

�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1�

1.5ml×1�

2-8℃保�

酶標(biāo)試劑

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

樣品稀釋液

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

顯色劑A�

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

顯色劑B�

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

終止�

3ml×1�

6ml×1�

2-8℃保�

濃縮洗滌�

�20ml×20倍)×1�

�20ml×30倍)×1�

2-8℃保�

 

樣本處理及要�

1.血清:室溫血液自然凝�10-20分鐘,離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過程中如出�(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心�

2.血漿:�(yīng)根據(jù)�(biāo)本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心�

3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照�(shí)行�

4.�(xì)胞培�(yǎng)上清:檢測分泌性的成份�(shí),用無菌管收集。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,�(xì)胞濃度達(dá)�100�/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出�(xì)胞內(nèi)成份。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心�

5.組織�(biāo)本:切割�(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保�?zhèn)溆谩�?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將�(biāo)本勻漿充分。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用�

操作步驟

  • �(biāo)�(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上�(shè)�(biāo)�(zhǔn)品孔10孔,�*、第二孔中分別加�(biāo)�(zhǔn)�100μl,然后在*、第二孔中加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后�*孔、第二孔中各�100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各�50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各�50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都�50μl,濃度分別為48ng/L�32ng/L �16ng/L�8ng/L� 4ng/L)�
  • 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)�待測樣品�。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品zui終稀釋度�5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁�輕輕晃動混勻
  • 溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘
  • 配液:將30�48T�20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30�48T�20倍)倍稀釋后備用�
  • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�(fù)5次,拍干�
  • 加酶:每孔加入酶�(biāo)試劑50μl,空白孔除外
  • 溫育:操作同3�
  • 洗滌:操作同5�
  • 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�15分鐘. 
  • 終止:每孔加終止�50μl,終止反�(yīng)(此�(shí)�(lán)色立�(zhuǎn)黃色�
  • 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔�吸光度(OD值) 測定�(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)�(jìn)行�

注意事項(xiàng)�

  • 試劑盒從冷藏�(huán)境中取出�(yīng)在室溫平�15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存�
  • 濃洗滌液可能會有�(jié)�析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助�,洗滌時(shí)不影響結(jié)果�
  • 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其�(zhǔn)確性,以避免試�(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘�(nèi),如�(biāo)本數(shù)量多�*使用排槍加樣�
  • 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)�(zhǔn)曲線,做�(fù)孔。如�(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)�(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請zui�乘以總稀釋倍數(shù)�×n×5)�
  • 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�
  • 底物請避光保存�
  • �(yán)格按照說明書的操作�(jìn)行,試驗(yàn)�(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀�(shù)為準(zhǔn).
  • 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都�(yīng)按傳染物處理�
  • 本試劑不同批號組分不得混用�

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)�

�(jì)�

以標(biāo)�(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐�(biāo)�    

在坐�(biāo)紙上繪出�(biāo)�(zhǔn)曲線,根�(jù)樣品的OD      

值由�(biāo)�(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘�稀�      

倍數(shù);或用標(biāo)�(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出�(biāo)      

�(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD�      

代入方程式,�(jì)算出樣品濃度,再乘以稀�      

倍數(shù),即為樣品的�(shí)際濃度�                  

  

                                              

 

 

(此圖僅供參考)

試劑盒性能�

1.樣品線性回歸與�(yù)期濃度相�(guān)系數(shù)R值為0.990以上�

2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%�11%

 

檢測范圍�                                              

2ng/L -60ng/L                                          

                            

保存條件及有效期�

1.試劑盒保存:�2-8

2.有效期�6�(gè)�

南京海克爾生物科技有限公司作�

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