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技�(shù)中心

� 胃泌素(Gastrin)ELISA 檢測試劑盒說明書

2010�10�26� 08:07:32人氣�425來源�上海通蔚生物科技有限公司

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� � �上海通蔚生物科技有限公司 需要積�0
�(guān) � �
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【資料簡介�

 人(human)胃泌素(Gastrin)ELISA 檢測試劑�
本試劑僅供研究使�  �(biāo)本:血清或血�

試驗(yàn)原理�
Gastrin試劑盒是固相夾心法酶�(lián)免疫吸附�(shí)�(yàn)(ELISA�.已知Gastrin濃度的標(biāo)�(zhǔn)�、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)�(jìn)行檢�。先將Gastrin和生物素�(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素�(biāo)記過的HRP。再�(jīng)過溫育和洗滌,去除未�(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中Gastrin的濃度呈比例�(guān)系�

試劑盒內(nèi)容及其配�
試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配� 48孔配� 配制
96/48人份酶標(biāo)� 1塊板�96T� 半塊板(48T� 即用�
塑料膜板� 1� 半塊 即用�
�(biāo)�(zhǔn)品:800pg/ml 1瓶(0.6ml� 1瓶(0.3ml� 按說明書�(jìn)行稀稀
空白�(duì)� 1瓶(1.0ml� 1瓶(0.5ml� 即用�
�(biāo)�(zhǔn)品稀釋緩沖液 1瓶(5ml� 1瓶(2.5ml� 即用�
生物素標(biāo)記的抗Gastrin抗體 1瓶(6ml� 1瓶(3.0ml� 即用�
親和鏈酶�-HRP 1瓶(10ml� 1瓶(5.0ml� 即用�
洗滌緩沖� 1瓶(20ml� 1瓶(10ml� 按說明書�(jìn)行稀�
底物A 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml� 即用�
底物B 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml� 即用�
終止� 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml� 即用�

自備材料
1� 蒸餾��
2� 加樣器:5ul�10ul�50ul�100ul�200�500ul�1000ul�
3� 振蕩器及磁力攪拌器等�

安全�
1� 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗�
2� �(shí)�(yàn)中不要吃�、抽煙或使用化妝品�
3� 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成��

操作注意事項(xiàng)
1� 試劑�(yīng)按標(biāo)簽說明書�(chǔ)�,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)�(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保��
2� �(shí)�(yàn)中不用的板條�(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)�
3� 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批�(hào)的試劑不要混�。保�(zhì)前使��
4� 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器�
5� 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品�
6� 洗滌酶標(biāo)板時(shí)�(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶�(biāo)反應(yīng)孔中吸水�
7� 底物A�(yīng)揮發(fā),避免長�(shí)間打開蓋�。底物B�(duì)光敏�,避免長�(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)�(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值�
8� 加入試劑的順序應(yīng)一�,以保證所有反�(yīng)板孔溫育的時(shí)間一��
9� 按照說明書中�(biāo)明的�(shí)�、加液的量及順序�(jìn)行溫育操��

樣品收集、處理及保存方法
1� 血�-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和�(nèi)毒素的試管。收集血液后�1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離�
2� 血�-----EDTA、檸檬酸�、肝素血漿可用于檢測�1000×g離心30分鐘去除顆粒�
3� �(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物�
4� 保存------如果樣品不立即使用,�(yīng)將其分成小部�-70 ℃保�,避免反�(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解�。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍�

試劑的準(zhǔn)�
1� �(biāo)�(zhǔn)品:�(biāo)�(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)�(yàn)�(shí)�(zhǔn)�,不能儲(chǔ)�。稀釋前將標(biāo)�(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中�(jìn)行:
800 pg/ml �6�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品) 原倍濃度不用稀釋直接加�50ul�
400 pg/ml �5�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品) 100ul的原倍標(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
200 pg/ml �4�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品) 100ul�5�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
100 pg/ml �3�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品) 100ul�4�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
50 pg/ml �2�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品) 100ul�3�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
25 pg/ml �1�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品) 100ul�2�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
0 pg/ml (空白對(duì)照) 原始濃度不用稀釋直接加�50ul�

2� 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾�50倍稀��

操作步驟
1� 使用�,將所有試劑充分混�。不要使液體�(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,�(chǎn)生加樣上的誤差�
2� 根據(jù)待測樣品�(shù)量加上標(biāo)�(zhǔn)品的�(shù)量決定所需的板條數(shù)。每�(gè)�(biāo)�(zhǔn)品和空白孔建議做�(fù)孔。每�(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來�,能使用�(fù)孔的盡量做復(fù)��
3� 加入稀釋好后的�(biāo)�(zhǔn)�50ul于反�(yīng)孔、加入待測樣�50ul于反�(yīng)孔內(nèi)。立即加�50ul的生物素�(biāo)記的抗體。蓋上膜�,輕輕振蕩混��37℃溫�1小時(shí)�
4� 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振�30�,甩去洗滌液,用吸水紙拍�。重�(fù)此操�3�。如果用洗板�(jī)洗滌,洗滌次�(shù)增加一��
5� 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混��37℃溫�30分鐘�
6� 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振�30�,甩去洗滌液,用吸水紙拍�。重�(fù)此操�3�。如果用洗板�(jī)洗滌,洗滌次�(shù)增加一次�
7� 每孔加入底物A、B�50ul,輕輕振蕩混��37℃溫�10分鐘。避免光��
8� 取出酶標(biāo)�,迅速加�50ul終止�,加入終止液后應(yīng)立即測定�(jié)果�
9� �450nm波長處測定各孔的OD��

建議使用的實(shí)�(yàn)方案
 �(biāo)�(zhǔn)品濃度(pg/ml� 
A 800 800 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品


局�
6�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品以上的�(jié)果為非線性的,根�(jù)此標(biāo)�(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果�

試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1�(hào)�(biāo)�(zhǔn)�。稀釋度的線�。樣品線性回歸與�(yù)期濃度相�(guān)系數(shù)R值為0.990�
2. 特異性:不與其它�(xì)胞因子反�(yīng)�
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系�(shù)均小�10%�

�(jié) � � � � � �
1、儀器值:于波�450nm的酶�(biāo)儀上讀取各孔的OD�

2、以吸光度OD值為縱坐�(biāo)(Y),相應(yīng)的Gastrin�(biāo)�(zhǔn)品濃度為橫坐�(biāo)(X�,做得相�(yīng)的曲�,樣品的Gastrin含量可根�(jù)其OD值由�(biāo)�(zhǔn)曲線換算出相�(yīng)的濃��

3、檢測值范圍:0-800pg/ml

4、敏感度� 1.0 pg/ml
 

上海通蔚生物科技有限公司作�

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