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技�(shù)中心

� 皮質(zhì)醇(Cortisol)ELISA 檢測試劑盒說明書

2010�10�26� 07:25:42人氣�377來源�上海通蔚生物科技有限公司

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� � �上海通蔚生物科技有限公司 需要積�0
�(guān) � �
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【資料簡介�

 人(Human)皮�(zhì)醇(Cortisol)ELISA 檢測試劑�
本試劑僅供研究使�  �(biāo)本:血清或血�

試驗原理�
Cortisol試劑盒是固相夾心法酶�(lián)免疫吸附實驗(ELISA�.已知Cortisol濃度的標(biāo)�(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)�(jìn)行檢測。先將Cortisol和生物素�(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素�(biāo)記過的HRP。再�(jīng)過溫育和洗滌,去除未�(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中Cortisol的濃度呈比例�(guān)系�

試劑盒內(nèi)容及其配�
試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配� 48孔配� 配制
96/48人份酶標(biāo)� 1塊板�96T� 半塊板(48T� 即用�
塑料膜板� 1� 半塊 即用�
�(biāo)�(zhǔn)品:800ng/ml 1瓶(0.6ml� 1瓶(0.3ml� 按說明書�(jìn)行稀稀
空白對照 1瓶(1.0ml� 1瓶(0.5ml� 即用�
�(biāo)�(zhǔn)品稀釋緩沖液 1瓶(5ml� 1瓶(2.5ml� 即用�
生物素標(biāo)記的抗Cortisol抗體 1瓶(6ml� 1瓶(3.0ml� 即用�
親和鏈酶�-HRP 1瓶(10ml� 1瓶(5.0ml� 即用�
洗滌緩沖� 1瓶(20ml� 1瓶(10ml� 按說明書�(jìn)行稀�
底物A 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml� 即用�
底物B 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml� 即用�
終止� 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml� 即用�

自備材料
1� 蒸餾水�
2� 加樣器:5ul�10ul�50ul�100ul�200�500ul�1000ul�
3� 振蕩器及磁力攪拌器等�

安全�
1� 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗�
2� 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品�
3� 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份�

操作注意事項
1� 試劑�(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)�(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存�
2� 實驗中不用的板條�(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)�
3� 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保�(zhì)前使用�
4� 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器�
5� 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品�
6� 洗滌酶標(biāo)板時�(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶�(biāo)反應(yīng)孔中吸水�
7� 底物A�(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后�(yīng)立即讀取OD值�
8� 加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反�(yīng)板孔溫育的時間一樣�
9� 按照說明書中�(biāo)明的時間、加液的量及順序�(jìn)行溫育操作�

樣品收集、處理及保存方法
1� 血�-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和�(nèi)毒素的試管。收集血液后�1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離�
2� 血�-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測�1000×g離心30分鐘去除顆粒�
3� �(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物�
4� 保存------如果樣品不立即使用,�(yīng)將其分成小部�-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍�

試劑的準(zhǔn)�
1� �(biāo)�(zhǔn)品:�(biāo)�(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時�(zhǔn)備,不能儲存。稀釋前將標(biāo)�(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中�(jìn)行:
800 ng/ml �6號標(biāo)�(zhǔn)品) 原倍濃度不用稀釋直接加�50ul�
400 ng/ml �5號標(biāo)�(zhǔn)品) 100ul的原倍標(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
200 ng/ml �4號標(biāo)�(zhǔn)品) 100ul�5號標(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
100 ng/ml �3號標(biāo)�(zhǔn)品) 100ul�4號標(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
50 ng/ml �2號標(biāo)�(zhǔn)品) 100ul�3號標(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
25 ng/ml �1號標(biāo)�(zhǔn)品) 100ul�2號標(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
0 ng/ml (空白對照) 原始濃度不用稀釋直接加�50ul�

2� 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾�50倍稀釋�

操作步驟
1� 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體�(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,�(chǎn)生加樣上的誤差�
2� 根據(jù)待測樣品�(shù)量加上標(biāo)�(zhǔn)品的�(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)�(zhǔn)品和空白孔建議做�(fù)孔。每個樣品根�(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔�
3� 加入稀釋好后的�(biāo)�(zhǔn)�50ul于反�(yīng)孔、加入待測樣�50ul于反�(yīng)孔內(nèi)。立即加�50ul的生物素�(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻�37℃溫�1小時�
4� 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重�(fù)此操�3次。如果用洗板�(jī)洗滌,洗滌次�(shù)增加一次�
5� 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫�30分鐘�
6� 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重�(fù)此操�3次。如果用洗板�(jī)洗滌,洗滌次�(shù)增加一次�
7� 每孔加入底物A、B�50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫�10分鐘。避免光照�
8� 取出酶標(biāo)板,迅速加�50ul終止液,加入終止液后�(yīng)立即測定�(jié)果�
9� �450nm波長處測定各孔的OD值�

建議使用的實驗方�
 �(biāo)�(zhǔn)品濃度(ng/ml� 
A 800 800 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品


局�
6號標(biāo)�(zhǔn)品以上的�(jié)果為非線性的,根�(jù)此標(biāo)�(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果�

試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)�(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與�(yù)期濃度相�(guān)系數(shù)R值為0.990�
2. 特異性:不與其它�(xì)胞因子反�(yīng)�
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系�(shù)均小�10%�

�(jié) � � � � � �
1、儀器值:于波�450nm的酶�(biāo)儀上讀取各孔的OD�

2、以吸光度OD值為縱坐�(biāo)(Y),相應(yīng)的Cortisol�(biāo)�(zhǔn)品濃度為橫坐�(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的Cortisol含量可根�(jù)其OD值由�(biāo)�(zhǔn)曲線換算出相�(yīng)的濃度�

3、檢測值范圍:0-800ng/ml

4、敏感度� 1.0 ng/ml
 

上海通蔚生物科技有限公司作�

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