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技�(shù)中心

谷氨酸(glutamic acid,Glu)含量試劑盒

2016�04�21� 17:23:31人氣�145來源�齊一生物科技(上海)有限公司

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� � �齊一生物科技(上海)有限公司 需要積�0
�(guān) � �谷氨酸(glutamic acid,Glu)含量試劑盒
【資料簡介�

谷氨�(glutamic acid,Glu)含量測定試劑�說明書分光光度法 50 �/48 � 
正式測定前務(wù)必取2-3�(gè)�(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定 
測定意義� 
Gu廣泛存在于動(dòng)�、植�、微生物和培�(yǎng)�(xì)胞中,不僅是組成蛋白�(zhì)�20 種氨基酸之一�
而且通過�(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合�,是生物體內(nèi)主要氨基來源之一。此�,Glu還是
味精的主要有效成�,常用做食品添加劑以及香料生�(chǎn)� 
測定原理� 
利用提取液提�,然后用顯色劑�(jìn)行顯�,顯色后� 570nm 下�(jìn)行測定� 
谷氨�(glutamic acid,Glu)含量測定試劑�需自備的儀器和用品� 
可見分光光度�(jì)、臺式離心機(jī)、可�(diào)式移液器�1 mL 玻璃比色�、研缽、冰、蒸餾水� 
試劑的組成和配制� 
試劑一:液�100mL×1 ��4℃保存; 
試劑二:粉劑×1 瓶,  4℃保�;臨用前加入 10mL 蒸餾�,充分混勻溶�,用不完的試�
�  4℃保�� 
谷氨酸提取:  
1、細(xì)菌或培養(yǎng)�(xì)胞樣品:先收集細(xì)菌或�(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上�;按照細(xì)菌或�(xì)�
�(shù)量(104
�(gè)):試劑一體積(mL)為 500~1000�1 的比例(建議 1000 萬細(xì)菌或�(xì)胞加�
2mL 試劑一� ,超聲波破碎�(xì)菌或�(xì)胞(冰浴,功� 20%或 200W,超� 3s,間� 10s,重
�(fù) 30 次)�8000g 常溫離心 10min,取上清,置冰上待測� 
2、組織樣品:按照組織�(zhì)量(g� :試劑一體積(mL)� 1�5~10 的比例(建議稱取� 0.2g�
織,加入 2mL試劑一�,�(jìn)行冰浴勻��8000g 常溫離心 10min,取上清,置冰上待測� 
3、血清(漿)或細(xì)胞培�(yǎng)液樣品:按照血清(漿)或細(xì)胞培�(yǎng)液體積(mL� :試劑一體積
(mL)� 1�5~10 的比例(建議� 0.2mL 血清(漿)或者細(xì)胞培�(yǎng)液加� 2mL 試劑一� ,�(jìn)
行冰浴勻漿�8000g 常溫離心10min,取上清,置冰上待測� 
 
谷氨�(glutamic acid,Glu)含量測定試劑�測定步驟 
1� 分光光度�(jì)�(yù)� 30min以上,調(diào)節(jié)波長� 570nm,蒸餾水�(diào)�� 
2� 在有� EP管中加入下列試劑� 
試劑名稱�μL�  測定�  對照� 
樣本  1000   
試劑一    1000 
試劑�  200  200 
混勻�90℃水�20min(蓋緊,以防止水分散失) ,流水冷�,于570nm波長處比�,△A=A
測定�-A 對照�。對照管只要做一�� 
注意事項(xiàng)� 
為提高檢測靈敏度,測定管的吸光值應(yīng)小于 1,若大于1 則需要將上清液用試劑一稀釋至�
�(dāng)倍數(shù)后測�,計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)�  
 
 
谷氨酸含量計(jì)算: 
1、標(biāo)�(zhǔn)條件下測定回歸方程為 y = 0.0328x- 2.423�  x為谷氨酸含量�µg/mL�,y為吸光值�  
2、按照血清(漿)或者細(xì)胞培�(yǎng)液體積計(jì)� 
谷氨酸含�(μg/mL)= [(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(V3×V1÷V2�=304.9×(△A+2.423) 
3、按照蛋白濃度計(jì)� 
谷氨酸含�(µg/mg prot)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(V1×Cpr)=30.49×(△A+2.423) ÷Cpr 
4、按照樣本質(zhì)量計(jì)� 
谷氨酸含�(µg/g鮮重)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(W ×V1÷V2)=61×(△A+2.423) ÷W 
5、按照細(xì)菌或�(xì)胞密度計(jì)� 
谷氨酸含�(μg/104
 cell)=[(△A +2.423)÷0.0328×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.061×(△A+2.423) 
V1:加入反�(yīng)體系中樣本體積,1mL;V2:加入提取液體積�2 mL;V3:加入血清(漿)
或細(xì)胞培�(yǎng)液體��0.2 mL�  Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g�1000�
�(xì)菌或�(xì)胞總�(shù)�1000�� 
注意:該試劑盒僅適用于發(fā)酵液或組織中谷氨酸含量測�,檢測下限為70µg/mL� 

谷氨�(glutamic acid,Glu)含量測定試劑盒齊一生物�(xiàn)貨供�(yīng)

齊一生物科技(上海)有限公司作�

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