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技�(shù)中心

人載脂蛋白C3(Apo C3)ELISA試劑盒技�(shù)原理

2016�03�15� 09:57:43人氣�128來源�上海研生生化試劑有限公司

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� � �上海研生生化試劑有限公司 需要積�0
�(guān) � �人載脂蛋白C3,Apo C3,ELISA試劑�
【資料簡介�

人載脂蛋白C3(Apo C3)ELISA試劑盒技�(shù)原理

本試劑盒僅供研究使用�

檢測(cè)范圍�96T
3μg/L -120μg/L

使用目的�人載脂蛋白C3(Apo C3)ELISA試劑�用于�(cè)定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中內(nèi)皮素 (ET)含量�

�(shí)�(yàn)原理
本試劑盒�(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠�(nèi)皮素 (ET)水平。用純化的大鼠內(nèi)皮素 (ET)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入�(nèi)皮素 (ET),再與HRP�(biāo)記的�(nèi)皮素 (ET)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體�(fù)合物,經(jīng)�*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成�(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的內(nèi)皮素 (ET)呈正相�(guān)。用酶標(biāo)儀�450nm波長下測(cè)定吸光度(OD值),通過�(biāo)�(zhǔn)曲線�(jì)算樣品中大鼠�(nèi)皮素 (ET)濃度�

人載脂蛋白C3(Apo C3)ELISA試劑��(biāo)本要�
1.標(biāo)本采集后盡早�(jìn)行提取,提取按相�(guān)文獻(xiàn)�(jìn)行,提取后應(yīng)盡快�(jìn)行實(shí)�(yàn)。若不能馬上�(jìn)行試�(yàn),可將標(biāo)本放�-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢�(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性�

操作步驟
1.�(biāo)�(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)�(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中�(jìn)行稀釋�

120μg/L5�(hào)�(biāo)�(zhǔn)�150μl的原倍標(biāo)�(zhǔn)品加�150μl�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
60μg/L4�(hào)�(biāo)�(zhǔn)�150μl�5�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�150μl�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
30μg/L3�(hào)�(biāo)�(zhǔn)�150μl�4�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�150μl�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
15μg/L2�(hào)�(biāo)�(zhǔn)�150μl�3�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�150μl�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
7.5μg/L1�(hào)�(biāo)�(zhǔn)�150μl�2�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�150μl�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白�(duì)照孔不加樣品及酶�(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)�(zhǔn)孔、待�(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上�(biāo)�(zhǔn)品準(zhǔn)確加�50μl,待�(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待�(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度�5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃�(dòng)混勻�
3.溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘�  
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�(fù)5次,拍干�
6.加酶:每孔加入酶�(biāo)試劑50μl,空白孔除外�
7.溫育:操作同3�
8.洗滌:操作同5�
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�15分鐘.
10.終止:每孔加終止�50μl,終止反�(yīng)(此�(shí)�(lán)色立�(zhuǎn)黃色)�
11.�(cè)定:以空白空�(diào)零,450nm波長依序�(cè)量各孔的吸光度(OD值)� �(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)�(jìn)行�

人載脂蛋白C3(Apo C3)ELISA試劑�注意事項(xiàng)
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出�(yīng)在室溫平�15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存�
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌�(shí)不影響結(jié)果�
3.各步加樣均�(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校�(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試�(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘�(nèi),如�(biāo)本數(shù)量多�*使用排槍加樣�
4.請(qǐng)每次�(cè)定的同時(shí)做標(biāo)�(zhǔn)曲線,做�(fù)孔。如�(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)�(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再�(cè)定,�(jì)算時(shí)�(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)�×n×5)�
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�
6.底物請(qǐng)避光保存�
7.嚴(yán)格按照說明書的操作�(jìn)行,試驗(yàn)�(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀�(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都�(yīng)按傳染物處理�
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用�
10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)�

保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃�
2.有效期�6�(gè)�

 

 

 

 

 

上海研生生化試劑有限公司作�

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