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技術中�

豚鼠干擾素試劑盒操作步驟

2016�02�16� 10:13:53人氣�191來源�上海酶聯生物研究所

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� � �上海酶聯生物研究所 需要積�0
� � �豚鼠干擾素試劑盒操作步驟
【資料簡介�

實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豚�γ干擾�(IFN-γ)。用純化的豚�γ干擾�(IFN-γ)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入γ干擾�(IFN-γ),再�  HRP 標記�γ干擾�(IFN-γ)抗體,形成抗�-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中�γ干擾�(IFN-γ)呈正相關。用酶標儀�450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中豚�γ干擾�(IFN-γ)濃度�
豚鼠干擾素試劑盒操作步驟試劑盒組�
30倍濃
20ml×1�
6ml×1�
12�×8�
6ml×1�
6ml×1�
6ml×1/�
終止�
6ml×1�
0.5ml×1�
1.5ml×1�
1�
2   酶標試劑
標準品(160 ng/L�
標準品稀釋液
3   酶標包被�
4   樣品稀釋液
5   顯色� A�
6   顯色� B�
10   說明�
11   封板�
12   密封�
2�
1�
標本�
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,可將標本放�-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,�   NaN3抑制辣根過(HRP)活性�
豚鼠干擾素試劑盒操作步驟操作步驟
1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋�
80 ng/L
40 ng/L
20 ng/L
10ng/L
5ng/L
5號標準品
4號標準品
3號標準品
2號標準品
1號標準品
150µl的原倍標準品加入  150µl標準品稀釋液
150µl�  5號標準品加入  150µl標準品稀釋液
150µl�  4號標準品加入  150µl標準品稀釋液
150µl�  3號標準品加入  150µl標準品稀釋液
150µl�  2號標準品加入  150µl標準品稀釋液
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔�
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加� 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測樣� 10µl(樣品zui終稀釋度� 5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻�
溫育:用封板膜封板后
37℃溫�30分鐘�
30倍稀釋后備用
配液:將 30倍濃
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜重復 5次,拍干�30秒后棄去,如�
加酶:每孔加入酶標試� 50µl,空白孔除外�
溫育:操作同 3�
洗滌:操作同 5�
顯色:每孔先加入顯色� A50µl,再加入顯色� B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�15分鐘.
10.終止:每孔加終止�50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)�
11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止液后 15分鐘以內進行�
豚鼠干擾素試劑盒操作步驟作程序總�
計算
以標準物的濃度為橫坐標, OD值為縱坐標,在坐標紙上,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與  OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度�
注意事項
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存�
2.濃洗滌液可能會有析出,稀釋時可在浴中加溫助溶,洗滌時不影響�
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時�
控制� 5分鐘內,如標本數量多�*使用排槍加樣�
4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本  OD�
大于標準品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計
算時請zui后乘以總稀釋倍數�×n×5)�
5.封板膜只限一次性使用,以避免交�
6.底物請避光保存�
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗�
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理�
9.本試劑不同批號組分不得混用�
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃�
2.有效期�6個月
 

 

上海酶聯生物研究所作�

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