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技�(shù)中心

雞心肌肌鈣蛋白檢測試劑盒僅供研究使用

2016�02�01� 09:31:59人氣�175來源�上海酶聯(lián)生物研究所

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� � �上海酶聯(lián)生物研究所 需要積�0
�(guān) � �雞心肌肌鈣蛋白檢測試劑盒僅供研究使用
【資料簡介�

雞心肌肌鈣蛋白檢測試劑盒僅供研究使用試驗(yàn)原理�
cTn-I試劑盒是固相夾心法酶�(lián)免疫吸附�(shí)�(yàn)(ELISA�.已知cTn-I濃度的標(biāo)�(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)�(jìn)行檢測。先將cTn-I�*�(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素�(biāo)記過的HRP。再�(jīng)過溫育和洗滌,去除未�(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中cTn-I的濃度呈比例�(guān)系�
試劑盒內(nèi)容及其配�
試劑盒成份(2-8℃保存)    96孔配�    48孔配�    配制
96/48人份酶標(biāo)�    1塊板�96T�    半塊板(48T�    即用�
塑料膜板�    1�    半塊    即用�
�(biāo)�(zhǔn)品:80ng/ml    1瓶(0.6ml�    1瓶(0.3ml�    按說明書�(jìn)行稀稀
空白對照    1瓶(1.0ml�    1瓶(0.5ml�    即用�
�(biāo)�(zhǔn)品稀釋緩沖液    1瓶(4.0ml�    1瓶(2.0ml�    即用�
*�(biāo)記的抗cTn-I抗體    1瓶(6.0ml�    1瓶(3.0ml�    即用�
親和鏈酶�-HRP    1瓶(8.0ml�    1瓶(4.0ml�    即用�
洗滌緩沖�    1瓶(20ml�    1瓶(10ml�    按說明書�(jìn)行稀�
底物A    1瓶(6.0ml�    1瓶(3.0ml�    即用�
底物B    1瓶(6.0ml�    1瓶(3.0ml�    即用�
終止�    1瓶(6.0ml�    1瓶(3.0ml�    即用�
�(biāo)本稀釋液    1瓶(12ml�    1瓶(6.0ml�    即用�
自備材料
1.蒸餾水�
2.加樣器�5ul�10ul�50ul�100ul�200ul�500ul�1000ul�
3.振蕩器及磁力攪拌器等�

雞心肌肌鈣蛋白檢測試劑盒僅供研究使用安全�
1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗�
2.實(shí)�(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品�
3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份�
雞心肌肌鈣蛋�-I (cTn-I) ELISA 檢測試劑盒操作注意事�(xiàng)
1.試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)�(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存�
2.實(shí)�(yàn)中不用的板條�(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)�
3.不用的其它試劑�(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保�(zhì)前使用�
4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器�
5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品�
6.洗滌酶�(biāo)板時(shí)�(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶�(biāo)反應(yīng)孔中吸水�
7.底物A�(yīng)揮發(fā),避免長�(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長�(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)�(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值�
8.加入試劑的順序�(yīng)一致,以保證所有反�(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣�
9.按照說明書中標(biāo)明的�(shí)間、加液的量及順序�(jìn)行溫育操作�
樣品收集、處理及保存方法
1、血�-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和�(nèi)毒素的試管。收集血液后�1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離�
2、血�-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測�1000×g離心30分鐘去除顆粒�
3、細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物�
4、組織勻�-----將組織加入適量生理鹽水搗碎�1000×g離心10分鐘,取上清�
5、保�------如果樣品不立即使用,�(yīng)將其分成小部�-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍�
試劑的準(zhǔn)�
1.標(biāo)�(zhǔn)品:�(biāo)�(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)�(yàn)�(shí)�(zhǔn)備,不能儲存。稀釋前將標(biāo)�(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中�(jìn)行:
80 ng/ml    �6號標(biāo)�(zhǔn)品)    原倍濃度不用稀釋直接加�50ul�
40 ng/ml    �5號標(biāo)�(zhǔn)品)    100ul的原倍標(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
20 ng/ml    �4號標(biāo)�(zhǔn)品)    100ul�5號標(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
10 ng/ml    �3號標(biāo)�(zhǔn)品)    100ul�4號標(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
5.0 ng/ml    �2號標(biāo)�(zhǔn)品)    100ul�3號標(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
2.5 ng/ml    �1號標(biāo)�(zhǔn)品)    100ul�2號標(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
0 ng/ml    (空白對照)    原始濃度不用稀釋直接加�50ul�
2.洗滌緩沖液�50×)的稀釋:蒸餾�50倍稀釋�
操作步驟
1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體�(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,�(chǎn)生加樣上的誤差�
2.根�(jù)待測樣品�(shù)量加上標(biāo)�(zhǔn)品的�(shù)量決定所需的板條數(shù)。每�(gè)�(biāo)�(zhǔn)品和空白孔建議做�(fù)孔。每�(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用�(biāo)本稀釋液1�1稀釋后加入50ul于反�(yīng)孔內(nèi)�
3.加入稀釋好后的�(biāo)�(zhǔn)�50ul于反�(yīng)孔、加入待測樣�50ul于反�(yīng)孔內(nèi)。立即加�50ul�*�(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻�37℃溫�1小時(shí)�
4.甩去孔�(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重�(fù)此操�3次。如果用洗板�(jī)洗滌,洗滌次�(shù)增加一次�
5.每孔加�60ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫�30分鐘�
6.甩去孔�(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重�(fù)此操�3次。如果用洗板�(jī)洗滌,洗滌次�(shù)增加一次�
7.每孔加入底物A、B�50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫�10分鐘。避免光照�
8.取出酶�(biāo)板,迅速加�50ul終止液,加入終止液后�(yīng)立即測定�(jié)果�
9.在450nm波長處測定各孔的OD值�
建議使用的實(shí)�(yàn)方案
    �(biāo)�(zhǔn)品濃度(ng/ml�    
A    80    80    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
B    40    40    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
C    20    20    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
D    10    10    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
E    5.0    5.0    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
F    2.5    2.5    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
G    0    0    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
H    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
局�
6號標(biāo)�(zhǔn)品以上的�(jié)果為非線性的,根�(jù)此標(biāo)�(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果�
雞心肌肌鈣蛋�-I (cTn-I) ELISA 檢測試劑盒試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)�(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與�(yù)期濃度相�(guān)系數(shù)R值為0.990�
2. 特異性:不與其它�(xì)胞因子反�(yīng)�
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系�(shù)均小�10%�
雞心肌肌鈣蛋白檢測試劑盒僅供研究使用�(jié)果判斷與分析
1、儀器值:于波�450nm的酶�(biāo)儀上讀取各孔的OD�
2、以吸光度OD值為縱坐�(biāo)(Y),相應(yīng)的cTn-I�(biāo)�(zhǔn)品濃度為橫坐�(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的cTn-I含量可根�(jù)其OD值由�(biāo)�(zhǔn)曲線換算出相�(yīng)的濃度�
3、檢測值范圍:0-80ng/ml
4、敏感度� 0.1 ng/ml 

上海酶聯(lián)生物研究所作�

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