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技術中�

人整合素ELISA檢測試劑盒使用說明書

2015�09�30� 08:52:34人氣�131來源�紀寧(上海)科研試劑經(jīng)銷商

資料類型doc文件資料大小17408
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� � �紀寧(上海)科研試劑經(jīng)銷商 需要積�0
� � �人整合素ELISA檢測試劑盒使用說明書
【資料簡介�

人整合素ELISA檢測試劑�檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往�
先包被整合素αVβ3(ITG αⅤ�3)抗體的包被微孔中,依次加入標本�
標準品、HRP標記的檢測抗體,�(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB�
色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成
zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的整合素αVβ3(ITG αⅤ�3)呈�
相關。用酶標儀�450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃
度�
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細�
刺激,收集血液后�3000 轉離�10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地
分離�
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝�3000 轉離�30 分鐘取上清�
3. 細胞上清液:3000 轉離�10 分鐘去除顆粒和聚合物�
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎�3000 轉離�10 分鐘
取上清�
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存�
-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍�
自備物品
1. 酶標儀�450nm�
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL�2-20uL�20-200uL�200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
人整合素ELISA檢測試劑�操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平�20 分鐘。從冰箱取出�
濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結�*溶解
后再使用�2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存�
3. 濃度�0 的S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明
書操作時樣本已經(jīng)稀�5 倍,zui終結果乘�5 才是樣本實際濃度�
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作�
5. 所有液體組分使用前充分搖勻�
試劑盒組�
名稱 96孔配� 48孔配� 備注
微孔酶標�12 孔�8 �12 孔�4 條無
標準�0.3mL*6 �0.3mL*6 管無
*6mL 3mL �
檢測抗體-HRP 10mL 5mL �
20×洗滌緩沖�25mL 15mL 按說明書進行稀�
底物A 6mL 3mL �
底物B 6mL 3mL �
終止�6mL 3mL �
封板�2 �2 張無
說明�1 �1 份無
自封�1 �1 個無
注:標準品(S0-S5)濃度依次為�0�4�8�16�32�64 ng/mL
試劑的準�
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1�20 稀釋,�1 份的20×洗滌�
沖液�19 份的蒸餾水�
洗板方法
1. 手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min 后甩�
孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗�5 次�
2. 自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸�1min,洗�5 次�
操作步驟
1. 從室溫平�20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封
袋密封放�4℃�
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準�50μL�
3. 樣本孔先加待測樣�10μL,再�*40μL;空白孔�
加�
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶
(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔�37℃水�
鍋或恒溫箱溫�60min�
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5 次(也可用洗板機洗板)�
6. 每孔加入底物A、B �50μL�37℃避光孵�15min�
7. 每孔加入終止�50μL�15min 內,�450nm 波長處測定各孔的
OD 值�
人整合素ELISA檢測試劑�結果判斷
繪制標準曲線:在Excel 工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應
OD 值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各�
本濃度值�
試劑盒性能
1. 準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R 值,大于等于
0.9900�
2. 靈敏度:zui低檢測濃度小�1.0 ng/mL�
3. 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應�
4. 重復性:板內、板間變異系�(shù)均小�15%�
5. 貯藏�2-8℃,避光防潮保存�
6. 有效期:6 個月
免責聲明
1. 試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所
�(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責�
2. 嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗�
承擔�
 
  

紀寧(上海)科研試劑經(jīng)銷商作�

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