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技�(shù)中心

雞Toll樣受�5酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

2015�08�18� 11:14:29人氣�159來源�紀(jì)寧(上海)科研試劑經(jīng)銷商

資料類型doc文件資料大小111104
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� � �紀(jì)寧(上海)科研試劑經(jīng)銷商 需要積�0
�(guān) � �雞Toll樣受�5酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
【資料簡介�

雞Toll樣受�5(TLR5)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

使用目的�

本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中牛Toll樣受�5(TLR5)含量�

實驗原理

雞Toll樣受�5酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書�(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中雞Toll樣受�5(TLR5)水平。用純化的雞Toll樣受�5(TLR5)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入Toll樣受�5(TLR5),再與HRP�(biāo)記的Toll樣受�5(TLR5)抗體�(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體�(fù)合物,經(jīng)�*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成�(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Toll樣受�5(TLR5)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀�450nm波長下測定吸光度(OD值),通過�(biāo)�(zhǔn)曲線計算樣品中雞Toll樣受�5(TLR5)濃度� 

試劑盒組� 

1 20倍濃縮洗滌液 20ml×1� 7 終止� 3ml×1�

2 酶標(biāo)試劑 3ml×1� 8 �(biāo)�(zhǔn)品(24ng/mL� 0.5ml×1�

3 酶標(biāo)包被� 12孔�4� 9 �(biāo)�(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1�

4 樣品稀釋液 3ml×1� 10 說明� 1�

5 顯色劑A� 3ml×1� 11 封板� 2�  

6 顯色劑B� 3ml×1/� 12 密封� 1�

�(biāo)本要� 

1.標(biāo)本采集后盡早�(jìn)行提取,提取按相�(guān)文獻(xiàn)�(jìn)行,提取后應(yīng)盡快�(jìn)行實驗。若不能馬上�(jìn)行試驗,可將�(biāo)本放�-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性�

操作步驟

1.�(biāo)�(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)�(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中�(jìn)行稀釋�

12ng/mL 5號標(biāo)�(zhǔn)� 150μl的原倍標(biāo)�(zhǔn)品加�150μl�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

6ng/mL 4號標(biāo)�(zhǔn)� 150μl�5號標(biāo)�(zhǔn)品加�150μl�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

3ng/mL 3號標(biāo)�(zhǔn)� 150μl�4號標(biāo)�(zhǔn)品加�150μl�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

1.5ng/mL 2號標(biāo)�(zhǔn)� 150μl�3號標(biāo)�(zhǔn)品加�150μl�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

0.75ng/mL 1號標(biāo)�(zhǔn)� 150μl�2號標(biāo)�(zhǔn)品加�150μl�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)�(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上�(biāo)�(zhǔn)品準(zhǔn)確加�50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品zui終稀釋度�5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻�

3.溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘�   

4.配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�(fù)5次,拍干�

6.加酶:每孔加入酶�(biāo)試劑50μl,空白孔除外� 

7.溫育:操作同3�

8.洗滌:操作同5�

9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�15分鐘.

10.終止:每孔加終止�50μl,終止反�(yīng)(此時藍(lán)色立�(zhuǎn)黃色)�

11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)� 測定�(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)�(jìn)行�

操作程序總結(jié)�

計算

雞Toll樣受�5酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書以標(biāo)�(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐�(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出�(biāo)�(zhǔn)曲線,根�(jù)樣品的OD值由�(biāo)�(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)�(zhǔn)物的濃度與OD值計算出�(biāo)�(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度� 

注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出�(yīng)在室溫平�15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存�

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響�(jié)果�

3.各步加樣均�(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其�(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘�(nèi),如�(biāo)本數(shù)量多�*使用排槍加樣�

4.請每次測定的同時做�(biāo)�(zhǔn)曲線,做�(fù)孔。如�(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)�(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)�

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�

6.底物請避光保存�

7.嚴(yán)格按照說明書的操作�(jìn)行,試驗�(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀�(shù)為準(zhǔn).

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都�(yīng)按傳染物處理�

9.本試劑不同批號組分不得混用�

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)�

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃�

2.有效期�6個月

紀(jì)寧(上海)科研試劑經(jīng)銷商作�

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