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技術中�

人分泌型免疫球蛋白A(SIgA)酶聯免疫分析試劑盒使用方法

2015�07�08� 08:36:56人氣�198來源�江蘇綠葉生物科技有限公司

資料類型doc文件資料大小108032
下載次數18資料圖片 【點擊查看�
� � �江蘇綠葉生物科技有限公司 需要積�0
� � �酶聯免疫分析試劑�
【資料簡介�

檢測范圍�                                                          96T

0.3μg/ ml -16μg/ ml


使用目的�

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中分泌型免疫球蛋�A(SIgA)含量

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本�人分泌型免疫球蛋�A(SIgA)水平。用純化�人分泌型免疫球蛋�A(SIgA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入分泌型免疫球蛋白A(SIgA)再與HRP標記�分泌型免疫球蛋白A(SIgA)抗體結合,形成抗�-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色�TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中�分泌型免疫球蛋白A(SIgA)呈正相關。用酶標儀�450nm波長下測定吸光度�OD值),通過標準曲線計算樣品�人分泌型免疫球蛋�A(SIgA)濃度�

試劑盒組�

1

30倍濃縮洗滌液

20ml×1

7

終止�

6ml×1

2

酶標試劑

6ml×1

8

標準品(32μg/ ml

0.5ml×1

3

酶標包被�

12孔�8

9

標準品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明�

1

5

顯色�A

6ml×1

11

封板�

2 

6

顯色�B

6ml×1/

12

密封�

1

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放�-20保存,但應避免反復凍�

2.不能檢測含NaN3的樣�,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的�HRP)活性�

操作步驟

  1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋�

16μg/ ml

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

8μg/ ml

4號標準品

150μl5號標準品加入150μl標準品稀釋液

4μg/ ml

3號標準品

150μl4號標準品加入150μl標準品稀釋液

2μg/ ml

2號標準品

150μl3號標準品加入150μl標準品稀釋液

1μg/ ml

1號標準品

150μl2號標準品加入150μl標準品稀釋液



  1. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔�待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加�50μl待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品zui終稀釋度�5倍)�加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻�
  2. 溫育:用封板膜封板后�37溫育30分鐘�  
  3. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
  4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�5次,拍干�
  5. 加酶:每孔加入酶標試�50μl,空白孔除外�
  6. 溫育:操作同3
  7. 洗滌:操作同5
  8. 顯色:每孔先加入顯色�A50μl,再加入顯色�B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.
  9. 終止:每孔加終止�50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)�
  10. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度�OD值)� 測定應在加終止液�15分鐘以內進行�

操作程序總結�


計算

  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品�OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品�OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度�

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存�

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果�

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多�*使用排槍加樣�

  1. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品�*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數�n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數�×n×5)�
  2. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�

6.底物請避光保存�

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為�.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理�

9.本試劑不同批號組分不得混用�

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準�

保存條件及有效期

1.試劑盒保存�2-8

2.有效期�6個月


江蘇綠葉生物科技有限公司作�

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