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技�(shù)中心

�5羥色胺(5-HT)ELISA試劑盒操作說明書

2015�04�16� 15:33:15人氣�218來源�卡邁舒化�(xué)技�(shù)(上海)有限公司

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� � �卡邁舒化�(xué)技�(shù)(上海)有限公司 需要積�0
�(guān) � �支原體ELISA試劑�,葉綠素A,胰蛋白胨
【資料簡介�

�5羥色�(5-HT)ELISA試劑盒操作說明書

本試劑僅供研究使用目的:

本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本�5羥色�(5-HT)的含量�

實驗原理�

   本試劑盒�(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中�5羥色�(5-HT)水平。用純化的人5羥色�(5-HT) 抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入5羥色�(5-HT),再與HRP標記�5羥色�(5-HT)抗體�(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體�(fù)合物,經(jīng)�*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下�(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人5羥色�(5-HT)呈正相關(guān)。用酶標儀�450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人5羥色�(5-HT)濃度�

試劑盒組成:

試劑盒組�

48孔配�

96孔配�

保存

說明�

1�

1�

 

封板�

2片(48�

2片(96�

 

密封�

1�

1�

 

酶標包被�

1×48

1×96

2-8℃保�

標準品:2700ng/L

0.5ml×1�

0.5ml×1�

2-8℃保�

標準品稀釋液

1.5ml×1�

1.5ml×1�

2-8℃保�

酶標試劑

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

樣品稀釋液

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

顯色劑A�

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

顯色劑B�

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

終止�

3ml×1�

6ml×1�

2-8℃保�

濃縮洗滌�

�20ml×20倍)×1�

�20ml×30倍)×1�

2-8℃保�

 

樣本處理及要求:

1. 血清:室溫血液自然凝�10-20分鐘,離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心�

2. 血漿:�(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混�10-20分鐘后,離心20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心�

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行�

4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100�/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞�(nèi)成份。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心�

5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保�?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用�

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后�(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放�-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性�

�5羥色�(5-HT)ELISA試劑盒操作說明書操作步驟

  1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上�(shè)標準品孔10孔,�*、第二孔中分別加標準�100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后�*孔、第二孔中各�100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各�50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各�50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都�50μl,濃度分別為1800ng/L�1200ng/L �600ng/L�300ng/L� 150ng/L)�
  2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品zui終稀釋度�5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻�
  3. 溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘�
  4. 配液:將30�48T�20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30�48T�20倍)倍稀釋后備用�
  5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�(fù)5次,拍干�
  6. 加酶:每孔加入酶標試�50μl,空白孔除外�
  7. 溫育:操作同3�
  8. 洗滌:操作同5�
  9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�15分鐘.
  10. 終止:每孔加終止�50μl,終止反�(yīng)(此時藍色立�(zhuǎn)黃色)�
  11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)� 測定�(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行�

�5羥色�(5-HT)ELISA試劑盒操作說明書注意事項�

  1. 試劑盒從冷藏�(huán)境中取出�(yīng)在室溫平�15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存�
  2. 濃洗滌液可能會有�(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響�(jié)果�
  3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘�(nèi),如標本�(shù)量多�*使用排槍加樣�
  4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物�(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品�*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)�
  5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�
  6. 底物請避光保存�
  7. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀�(shù)為準.
  8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都�(yīng)按傳染物處理�
  9. 本試劑不同批號組分不得混用�

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準�

計算�

以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,   

在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD     

值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀�      

倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出�      

準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD�      

代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀�      

倍數(shù),即為樣品的實際濃度�                  

試劑盒性能�

1.樣品線性回歸與�(yù)期濃度相�(guān)系數(shù)R值為0.95以上�

2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%�11%

 

檢測范圍�                                             

100ng/L -2000ng/L                                       

                           

保存條件及有效期�

1.試劑盒保存:�2-8℃�

2.有效期�6個月

卡邁舒化�(xué)技�(shù)(上海)有限公司作�

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