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人血小板活化因子PAF試劑盒原理分�

2015�01�29� 14:34:43人氣�422來源�上海谷研實業(yè)有限公司

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� � �上海谷研實業(yè)有限公司 需要積�0
�(guān) � �人血小板活化因子PAF試劑盒原理分�
【資料簡介�

人血小板活化因子PAF試劑盒原理分�

本試劑僅供研究使�  �(biāo)本:血清或血�

試驗原理�
人血小板活化因子PAF試劑盒是固相夾心法酶�(lián)免疫吸附實驗(ELISA�.已知PAF濃度的標(biāo)�(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)�(jìn)行檢測。先將PAF和標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素�(biāo)記過的HRP。再�(jīng)過溫育和洗滌,去除未�(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中PAF的濃度呈比例�(guān)系�

自備材料

� 蒸餾水�

2� 加樣器:5ul�0ul�50ul�00ul�200�500ul�000ul�

3� 振蕩器及磁力攪拌器等�

安全�

� 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗�

2� 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品�

3� 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份�

操作注意事項

� 試劑�(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)�(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存�

2� 實驗中不用的板條�(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)�

3� 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保�(zhì)前使用�

4� 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器�

5� 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品�

6� 洗滌酶標(biāo)板時�(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶�(biāo)反應(yīng)孔中吸水�

7� 底物A�(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后�(yīng)立即讀取OD值�

8� 加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反�(yīng)板孔溫育的時間一樣�

9� 人血小板活化因子PAF按照說明書中�(biāo)明的時間、加液的量及順序�(jìn)行溫育操作�

樣品收集、處理及保存方法

� 血�-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和�(nèi)毒素的試管。收集血液后�000×g離心0分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離�

2� 血�-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測�000×g離心30分鐘去除顆粒�

3� �(xì)胞上清液---000×g離心0分鐘去除顆粒和聚合物�

4� 保存------如果樣品不立即使用,�(yīng)將其分成小部�-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍�

試劑的準(zhǔn)�

�(biāo)�(zhǔn)品:�(biāo)�(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時�(zhǔn)備,不能儲存。稀釋前將標(biāo)�(zhǔn)品振蕩混勻�
洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾�50倍稀釋�

操作步驟

� 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體�(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,�(chǎn)生加樣上的誤差�

2� 根據(jù)待測樣品�(shù)量加上標(biāo)�(zhǔn)品的�(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)�(zhǔn)品和空白孔建議做�(fù)孔。每個樣品根�(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔�

3� 加入稀釋好后的�(biāo)�(zhǔn)�50ul于反�(yīng)孔、加入待測樣�50ul于反�(yīng)孔內(nèi)。立即加�50ul的標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻�37℃溫育小時�

4� 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重�(fù)此操�3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次�

5� 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫�30分鐘�

6� 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重�(fù)此操�3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次�

7� 每孔加入底物A、B�50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫�0分鐘。避免光照�

8� 人血小板活化因子PAF取出酶標(biāo)板,迅速加�50ul終止液,加入終止液后�(yīng)立即測定�(jié)果�

9� �450nm波長處測定各孔的OD值�

局�

6號標(biāo)�(zhǔn)品以上的�(jié)果為非線性的,根�(jù)此標(biāo)�(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果�

試劑盒性能

. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于號標(biāo)�(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與�(yù)期濃度相�(guān)系數(shù)R值為0.990�

2. 特異性:不與人其它細(xì)胞因子反�(yīng)�

3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系�(shù)均小�0%�

�(jié) � � � � � �

、儀器值:于波�450nm的酶�(biāo)儀上讀取各孔的OD�

2、以吸光度OD值為縱坐�(biāo)(Y),相應(yīng)的PAF�(biāo)�(zhǔn)品濃度為橫坐�(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的PAF含量可根�(jù)其OD值由�(biāo)�(zhǔn)曲線換算出相�(yīng)的濃度�

3、檢測值范圍:0-80ng/ml

4、敏感度� 0. ng/ml

上海谷研實業(yè)有限公司作�

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