紀寧(上海)科研試劑經銷商作�
大鼠MT抗小鼠ELISA試劑盒抗血清的技術原�
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� � � | 大鼠MT抗小鼠ELISA試劑盒抗血清的技術原� |
- 【資料簡介�
ELISA試劑盒以其快速、準確、安全、簡便的特點而成為定量測定生物體內微量有機物的理想方�.為了建立一套快速、有效、方便并能定量測�大鼠MT抗小鼠ELISA試劑盒抗血��,為動物科學中的研究和應用提供MT的定量測定技�.
1.大鼠MT抗小鼠ELISA試劑盒抗血�的制�:用戊二醛法將純品Zn-MT與載體蛋�(BSA)偶聯�,作為人工抗原,對大鼠皮下注�.免疫時抗原中MT量分別為6ug/只�12ug/只�24ug/只�48ug/只�96ug/�;加強免疫時所用抗原量依次加�.�3次免疫時采用的是弗氏*佐劑乳化,�3次免疫采用弗氏不*佐劑乳化. 兩批大鼠加強免疫的時間隔分別�12日和16�.用免疫雙擴散方法測定抗血清效�.得出以下結論:當免疫抗原中MT的量�12-24ug/�,每次加強免疫時抗原量加�,加強免疫間隔時間�10日時,其免疫效果較�,可使大部分大鼠抗血清效價達�1:16以上.
2.抗體的純化及鑒定:將效價達�1:16以上�大鼠MT抗小鼠ELISA試劑盒抗血�血清用飽和硫酸銨鹽析法濃縮�γ-球蛋�,然后用DEAE-Sephadex A50層析柱分離提純IgG.實驗中發現洗脫液pH值為7.4時洗�*峰即為純化的IgG,用不連續緩沖系統聚丙烯酰胺凝膠濃度梯度電泳鑒定層析洗脫下的IgG達到電泳�.對純化后的IgG進行辣根過氧化物酶標�,用直接ELISA鑒定其為MT的特異性抗�.
3.ELISA試劑盒的建立:運用固相抗原間接非競爭型ELISA試劑盒和固相抗原間接競爭型ELISA試劑盒檢測豬體組織中部分樣品MT的含�,結果表明:用間接非競爭型ELISA試劑盒測定樣品時其結果不夠穩�,同一樣品所對應�0D值相差較�,此方法僅適合于樣品中MT定性檢�;采用間接競爭型ELISA測定樣品,OD值比較穩�.用方陣滴定法確定了間接競爭型ELISA的各項具體條�:抗原*包被濃度�6.25ug/ml,一�(小鼠抗大�)使用適宜濃度�50ug/ml,酶標抗體(山羊抗大�)的使用濃度為1/8000�,反應時間�3hr.用標準MT,采用間接競爭型ELISA試劑盒方法擬合的標準曲線回歸方程�:y=105×2(22.32880-0.39583x),相關系數�:R=0.9592.該方法的靈敏度為4.1ng/ml,批間和批內變異系數為9.9760�-14.3858�,在實際應用中有較好的穩定�.
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