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技�(shù)中心

植物乙烯(ETH)Elisa試劑盒說明書

2014�09�15� 08:57:01人氣�366來源�上海雅吉生物科技有限公司

資料類型pdf文件資料大小137680
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� � �上海雅吉生物科技有限公司 需要積�0
�(guān) � �植物乙烯(ETH)Elisa試劑盒說明書,植物乙烯(ETH)Elisa試劑�
【資料簡介�

植物乙烯(ETH)Elisa試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用�
檢測范圍� 96T
10ng/L - 320ng/L
使用目的�
本試劑盒用于測定植物組織,細(xì)胞及其它相關(guān)樣本中乙烯(ETH)含量�
�(shí)�(yàn)原理
植物乙烯(ETH)Elisa試劑盒說明書�本試劑盒�(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中植物乙烯(ETH)水平。用純化的植物乙烯(ETH�
抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入植物乙烯(ETH),再與HRP
�(biāo)記的乙烯(ETH)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體�(fù)合物,經(jīng)�*洗滌后加底物TMB
顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成�(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的�
淺和樣品中的植物乙烯(ETH)呈正相�(guān)。用酶標(biāo)儀�450nm 波長下測定吸光度(OD 值)�
通過�(biāo)�(zhǔn)曲線�(jì)算樣品中植物乙烯(ETH)濃度�
試劑盒組�
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 � 7 終止� 6ml×1 �
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 � 8 �(biāo)�(zhǔn)品(640ng/L� 0.5ml×1 �
3 酶標(biāo)包被� 12 �×8 � 9 �(biāo)�(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 �
4 樣品稀釋液 6ml×1 � 10 說明� 1 �
5 顯色劑A � 6ml×1 � 11 封板� 2 �
6 顯色劑B � 6ml×1/� 12 密封� 1 �(gè)
�(biāo)本要�
1.標(biāo)本采集后盡早�(jìn)行提取,提取按相�(guān)文獻(xiàn)�(jìn)行,提取后應(yīng)盡快�(jìn)行實(shí)�(yàn)。若不能
馬上�(jìn)行試�(yàn),可將標(biāo)本放�-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性�
操作步驟
1. �(biāo)�(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)�(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中�(jìn)行稀
釋�
320ng/L 5 �(hào)�(biāo)�(zhǔn)� 150μl 的原倍標(biāo)�(zhǔn)品加�150μl �(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
160ng/L 4 �(hào)�(biāo)�(zhǔn)� 150μl �5 �(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�150μl �(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
80ng/L 3 �(hào)�(biāo)�(zhǔn)� 150μl �4 �(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�150μl �(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
40ng/L 2 �(hào)�(biāo)�(zhǔn)� 150μl �3 �(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�150μl �(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
20ng/L 1 �(hào)�(biāo)�(zhǔn)� 150μl �2 �(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�150μl �(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白�(duì)照孔不加樣品及酶�(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)�(zhǔn)孔�
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上�(biāo)�(zhǔn)品準(zhǔn)確加�50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl�
然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度�5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃�(dòng)混勻�
3. 溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30 分鐘�
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30 秒后棄去,如�
重復(fù)5 次,拍干�
6. 加酶:每孔加入酶�(biāo)試劑50μl,空白孔除外�
7. 溫育:操作同3�
8. 洗滌:操作同5�
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止�50μl,終止反�(yīng)(此�(shí)�(lán)色立�(zhuǎn)黃色)�
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)� 測定�(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)�(jìn)行�
操作程序總結(jié)�
�(jì)�
以標(biāo)�(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐�(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出�(biāo)�(zhǔn)曲線,根�(jù)樣品�
OD 值由�(biāo)�(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)�(zhǔn)物的濃度與OD 值計(jì)算出�(biāo)
�(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù)�
即為樣品的實(shí)際濃度�
注意事項(xiàng)
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出�(yīng)在室溫平�15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存�
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌�(shí)不影響結(jié)果�
3.各步加樣均�(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校�(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試�(yàn)誤差。一次加樣時(shí)�
控制�5 分鐘�(nèi),如�(biāo)本數(shù)量多�*使用排槍加樣�
4� 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)�(zhǔn)曲線,做�(fù)孔。如�(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD �
大于�(biāo)�(zhǔn)品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計(jì)
算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)�×n×5)�
5� 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�
6.底物請避光保存�
7.嚴(yán)格按照說明書的操作�(jìn)行,試驗(yàn)�(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀�(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都�(yīng)按傳染物處理�
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用�
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)�
植物乙烯(ETH)Elisa試劑盒說明書�保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃�
2.有效期�6 �(gè)�

上海雅吉生物科技有限公司作�

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