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技術中�

大鼠內皮型NO合酶(eNOS)Elisa試劑盒使用說明書

2010�05�21� 22:15:14人氣�201來源�江萊生物-中國老牌試劑供應�

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� � �大鼠內皮型NO合酶(eNOS)Elisa試劑盒使用說明書
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【資料簡介�

本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫學診斷�

 

大鼠內皮�NO合酶�eNOS)定�檢測試劑盒(ELISA

使用說明�

                                                                                                                            

【試劑盒名稱�

大鼠內皮�NO合酶�eNOS)定量檢測試劑盒�ELISA

【試劑盒用�

定量檢測大鼠血清、血漿及相關液體樣本�內皮�NO合酶�eNOS的含量�

【檢�原理

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯免疫吸附法�ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預先包被大鼠內皮�NO合酶�eNOS單克隆抗體透明酶標包被板中�溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分�再加入酶標工作液�溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分。依次加入底�AB,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉化為藍色產物,在酸的作用下變成黃色�顏色的深淺與樣品�大鼠內皮�NO合酶�eNOS)濃�呈正相關�450nm波長下測�OD值,根據標準品和樣品�OD值,計算樣本中大�內皮�NO合酶�eNOS含量�

【試劑盒組成

1

酶標包被�

12×4

7

顯色�A

3mL

2

標準�

0.3mL×6

8

顯色�B

3mL

3

20倍濃縮洗滌液

15mL

9

終止�

3mL

4

*

3mL

10

說明�

1

5

特殊稀釋液

3mL

11

封板�

2

6

酶標試劑

3mL

12

密封�

1

備注�標準品(16號)濃度依次為:482412631.5 U/L

 

需要而未提供的試劑和器材

137恒溫�

2�標準規格酶標儀

3�精密移液器及一次性吸�

4�蒸餾�

5�一次性試�

6�吸水�

【操作步驟�

1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平�30分鐘�

2、配液:用蒸餾水�20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液�

3、加標準品和待測樣本:取足夠數量�酶標包被板,固定于框架上�分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準�50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再�*40μL(即樣本稀�5倍);空白對照孔不加�

4、溫育:37水浴鍋或恒溫箱溫�30min

5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)�

6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作�50μL,空白對照孔不加�

7、溫育:37水浴鍋或恒溫箱溫�30min

8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)�

9、顯色:每孔先加入顯色劑A 50μL,再加入顯色�B 50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37避光顯色15min

10、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(顏色由藍色立轉黃色)�

11、測定:以空白孔調零,在終止�15分鐘內,�450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)�

12、計算:根據標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣本�OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數�

【樣本要求�

1、樣�不能含疊氮鈉(NaN3,因�疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑�

2�標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放�-20℃保存,但應避免反復凍融�

3、樣本應充分離心,不得有溶血及顆粒�

【注意事項�

1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準�

2酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存�

3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差�

4、牢記樣本已經稀�5倍,計算結果乘以5才是樣本實際濃度�

5、本試劑盒定量范圍為1.5-48 U/L,超過此范圍,為標準曲線延伸計算所得,不做為準確定量結果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果�1.5-48 U/L范圍內),乘以總稀釋倍數即為樣本zui終濃度�

6、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間�

7、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液�*和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微�;不得重復使�封板�

8、試劑盒保質期內使用,不同批號的試劑不得混用�

9、底�B對光敏感,避免長時間暴露于光下�

 

【操作程序總結�

 

準備試劑,樣品和標準�

 


 

加入準備好的樣品和標準品�37反應30分鐘

 

洗板4次,加入酶標試劑�37反應30分鐘

 

洗板4次,加入顯色�AB37顯色15分鐘

 

加入終止�

 

15分鐘之內讀OD

 

計算

 

檢測范圍

1.5 U/L - 48 U/L

【規格�

48人份/

【貯藏�

2-8,避光防潮保存�

【有效期�

6個月

 

江萊生物-中國老牌試劑供應�作�

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