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技�(shù)中心

植物凝集素(PA)ELISA試劑盒說明書

2014�03�07� 14:42:58人氣�164來源�上海研謹(jǐn)生物科技有限公司

資料類型pdf文件資料大小515693
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�(guān) � �植物凝集�,凝集素ELISA說明�,PA試劑�,凝集�,凝集素檢�
【資料簡介�

植物凝集素(PA)ELISA試劑盒說明書

本試劑僅供研究使�       目的:本試劑盒用于測定組織,�(xì)胞及其它相關(guān)樣本�植物凝集素(PA�含量�高品�(zhì)ELISA試劑盒供�(yīng)商,品質(zhì),售后完善。歡迎垂詢,并提供免費代檢測服務(wù)�

實驗原理

   本試劑盒�(yīng)用雙抗體夾心法測��(biāo)�植物凝集素(PA水平。用純化�植物凝集素(PA抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入植物凝集素(PA),再與HRP�(biāo)記的植物凝集素(PA)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體�(fù)合物,經(jīng)�*洗滌�底物TMB顯色。TMB�HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成�(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中�植物凝集素(PA呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀�450nm波長下測定吸光度(OD值)�通過�(biāo)�(zhǔn)曲線計算樣品植物凝集素(PA濃度�

 

試劑盒組�

試劑盒組�

48孔配�

96孔配�

保存

說明�

1�

1�

 

封板�

2片(48�

2片(96�

 

密封�

1�

1�

 

酶標(biāo)包被�

1×48

1×96

2-8℃保�

�(biāo)�(zhǔn)品:900ng/L

0.5ml×1�

0.5ml×1�

2-8℃保�

�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1�

1.5ml×1�

2-8℃保�

酶標(biāo)試劑

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

樣品稀釋液

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

顯色劑A�

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

顯色劑B�

3 ml×1�

6 ml×1�

2-8℃保�

終止�

3ml×1�

6ml×1�

2-8℃保�

濃縮洗滌�

�20ml×20倍)×1�

�20ml×30倍)×1�

2-8℃保�

 

�(biāo)本要求:

1.標(biāo)本采集后盡早�(jìn)行提取,提取按相�(guān)文獻(xiàn)�(jìn)行,提取后應(yīng)盡快�(jìn)行實驗。若不能馬上�(jìn)行試驗,�將標(biāo)本放�-20℃保存,��(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含NaN3的樣�,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性�

 

操作步驟�

  1. �(biāo)�(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上�(shè)�(biāo)�(zhǔn)品孔10孔,�*、第二孔中分別加�(biāo)�(zhǔn)�100μl,然后在*、第二孔中加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后�*孔、第二孔中各�100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各�50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各�50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都�50μl,濃度分別為600ng/L�400ng/L �200ng/L�100ng/L� 50ng/L)�
  2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)�待測樣品�。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品zui終稀釋度�5倍)�加樣將樣品加于酶�(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁�輕輕晃動混勻
  3. 溫育:用封板膜封板后�37℃溫�0分鐘
  4. 配液:將30�48T�20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30�48T�20倍)倍稀釋后備用�
  5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�(fù)5次,拍干�
  6. 加酶:每孔加入酶�(biāo)試劑50μl,空白孔除外
  7. 溫育:操作同3�
  8. 洗滌:操作同5�
  9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�15分鐘.
  10. 終止:每孔加終止�50μl,終止反�(yīng)(此時藍(lán)色立�(zhuǎn)黃色�
  11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔�吸光度(OD值) 測定�(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)�(jìn)行�

 

注意事項�

  1. 試劑盒從冷藏�(huán)境中取出�(yīng)在室溫平�15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存�
  2. 濃洗滌液可能會有�(jié)�析出,稀釋時可在水浴中加溫助�,洗滌時不影響結(jié)果�
  3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其�(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘�(nèi),如�(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣�
  4. 請每次測定的同時做標(biāo)�(zhǔn)曲線,做�(fù)孔。如�(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)�(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui�乘以總稀釋倍數(shù)�×n×5)�
  5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�
  6. 底物請避光保存�
  7. �(yán)格按照說明書的操作�(jìn)行,試驗�(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀�(shù)為準(zhǔn).
  8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都�(yīng)按傳染物處理�
  9. 本試劑不同批號組分不得混用�

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)�

 

 

 

 

 

 

 

 

計算

以標(biāo)�(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐�(biāo)�   

在坐�(biāo)紙上繪出�(biāo)�(zhǔn)曲線,根�(jù)樣品的OD     

值由�(biāo)�(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘�稀�      

倍數(shù);或用標(biāo)�(zhǔn)物的濃度與OD值計算出�(biāo)     

�(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD�     

代入方程式,計算出樣品濃度,再乘�稀�      

倍數(shù),即為樣品的實際濃度�                 

 

                                             

 

(此圖僅供參考)

 

 

 

試劑盒性能�

1.樣品線性回歸與�(yù)期濃度相�(guān)系數(shù)R值為0.92以上�

2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%�15%

保存條件及有效期�

1.試劑盒保存:�2-8

2.有效期�6個月

上海研謹(jǐn)生物科技有限公司作�

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