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技術中�

馬乙型腦炎病毒酶聯免疫分析(ELISA�

2013�09�09� 09:09:52人氣�190來源�上海逸峰生物科技有限公司

資料類型doc文件資料大小57344
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� � �上海逸峰生物科技有限公司 需要積�0
� � �馬乙型腦炎病毒酶聯免疫分�,(ELISA�
【資料簡介�

乙型腦炎病毒酶聯免疫分析�ELISA

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用�

藥品名稱�

通用名:馬藍耳病毒酶聯免疫分析試劑盒

使用目的�

本試劑盒用于定性測定馬血清,血漿及相關液體樣本�乙型腦炎病毒

實驗原理

本試劑盒采用間接法測定標本中�乙型腦炎病毒。用純化�乙型腦炎病毒抗體包被微孔板,制成固相抗體,與樣品�乙型腦炎病毒溫育后,加入*標記的抗IgG抗體,再與鏈霉親和素-HRP結合,形成免疫復合物,經�*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀�450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中�乙型腦炎病毒的存在與否。,

試劑�組成

1

20倍濃縮洗滌液

50ml×1�

8

樣品稀釋液

6ml×1�

2

鏈霉親和�-HRP

6ml×1�

9

陰性對�

0.5ml×1�

3

酶標包被�

12�×8�

10

陽性對�

0.5ml×1�

4

*標記的抗-IgG抗體

6ml×1�

11

密封�

1�

5

顯色劑A�

6ml×1�

12

封板�

3�

6

顯色劑B�

6ml×1/�

13

說明�

1�

7

終止�

6ml×1�

 

 

 

 

標本要求

1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性�

2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放�-20℃保存,但應避免反復凍融

操作步驟

  1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對�2孔、陽性對�2孔、空白對照(不加樣品�*標記的抗-IgG抗體,鏈霉親和素-HRP,其余操作相同)1�
  2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對�50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,37℃溫�45分鐘�
  3. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
  4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�4次,拍干�
  5. �*標記的抗-IgG抗體:每孔加�*標記的抗-IgG抗體50μl(空白孔除外)�37℃溫�30分鐘
  6. 洗滌:操作同4�
  7. 加鏈霉親和素-HRP:每孔加�50μl的鏈酶親和素-HRP(空白孔除外),輕輕振蕩混勻�37℃溫�30分鐘�
  8. 洗滌:操作同4�
  9. 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�15分鐘.
  10. 終止:每孔加終止�50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)�
  11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)� 測定應在加終止液�15分鐘以內進行�

 

 

結果判定�

  試驗有效性:陽性對照孔平均�≥1.00; 陰性對照平均�≤0.10

  臨界值(CUT OFF)計算:臨界�=陰性對照孔平均�+0.15

  陰性判定:樣品OD�< 臨界值(CUT OFF)者為�乙型腦炎病毒陰�

  陽性判定:樣品OD�≥ 臨界值(CUT OFF)者為�乙型腦炎病毒陽�

 

注意事項

1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用�

2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存�

3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果�

  1. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�

5.底物請避光保存�

6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液�2M的硫酸,使用時必須注意安全�

規格�

96人份/�

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃�

2.有效期�6個月

 

 

上海逸峰生物科技有限公司作�

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