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技術中�

人白細胞介素18(IL-18)試劑盒(ELISA)使用說明書

2013�09�05� 10:47:59人氣�101來源�上海瓦蘭生物科技有限公司

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� � �上海瓦蘭生物科技有限公司 需要積�0
� � �白細胞介�,白介�18,IL-18,ELISA,試劑�
【資料簡介�

人白細胞介素18(IL-18)試劑盒(ELISA�

使用說明�

 

 

                

 

 

  • 本試劑盒用于體外定量檢測人血清、血漿中白細胞介�18(IL-18)的含量�
  • 有效期:6個月
  • 保存條件�2-8�

 

 

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被白細胞介�18(IL-18)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育�*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素18(IL-18)呈正相關。用酶標儀�450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度�

 

樣本處理及要�

1.  血�:全血標本請于室溫放置2小時�4℃過夜后�1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放�-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融�
2.  血�:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或將標本放�-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融�
3.  細胞培養物上清或其它生物標本�1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放�-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融�
注:標本溶血會影響zui后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測�
 

需要而未提供的試劑和器材

  1. 酶標儀�450nm�
  2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL�2-20uL�20-200uL�200-1000uL
  3. 37℃恒溫箱
  4. 蒸餾水或去離子水

 

試劑盒組�

名稱

96孔配�

48孔配�

備注

微孔酶標�

12�×8�

12�×4�

標準�

0.5mL*6�

0.5mL*6�

*

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖�

25mL

15mL

按說明書進行稀�

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止�

6mL

3mL

封板�

2�

2�

說明�

1�

1�

自封�

1�

1�

備注

1.  標準品濃度依次為�120�60�30�15�7.5�3.75 pg/mL

2.  經過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內,實驗過程中直接�50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過zui大標準品濃度時,可用*將標本進行適當稀釋后再進行實驗�

 

注意事項

  1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑�
  2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉�
  3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值�
  4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經變藍的底物液不能使用�
  5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果�
  6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射�
  7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上�
  8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性�
  9. 不能使用過期產品�
  10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置�

 

試劑準備

試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用�

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1�20稀釋,�1�20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水�

 

操作步驟

  1.   從室溫平�20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放�4℃�
  2.   設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準�50μL�
  3.   樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加�
  4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔�37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min�
  5.   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)�
  6.   每孔加入底物A、B�50μL�37℃避光孵�15min�
  7.   每孔加入終止�50μL�15min內,�450nm波長處測定各孔的OD值�

 

實驗結果計算

以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度�

 

試劑盒性能

1.  檢測范圍�3.75 pg/mL - 120 pg/mL�

2.  靈敏度:zui低檢測濃度小�1.0 pg/mL�

3.  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應�

4.  重復性:板內、板間變異系數均小于15%�

上海瓦蘭生物科技有限公司作�

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