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技術中�

大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)酶聯免疫分�

2013�02�25� 16:56:17人氣�392來源�上海恒遠生物科技有限公司

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� � �上海恒遠生物科技有限公司 需要積�0
� � �大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)酶聯免疫分�,NAG酶聯免疫分析,大鼠N-乙酰-β-D
【資料簡介�

大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)酶聯免疫分�
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用�
檢測范圍� 96T
10U/L -320 U/L
使用目的�
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷�
(NAG)含量�
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)水
平。用純化的大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)抗體包被微孔板,制成固相抗體,
往包被單抗的微孔中依次加入NAG,再與HRP 標記的NAG 抗體結合,形成抗�-抗原-�
標抗體復合物,經�*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色�
并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的NAG 呈正相關。用酶標儀�
450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄
糖苷酶(NAG)濃度�
試劑盒組�
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 � 7 終止� 6ml×1 �
2 酶標試劑 6ml×1 � 8 標準品(640 U/L� 0.5ml×1 �
3 酶標包被� 12 �×8 � 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 �
4 樣品稀釋液 6ml×1 � 10 說明� 1 �
5 顯色劑A � 6ml×1 � 11 封板� 2 �
6 顯色劑B � 6ml×1/� 12 密封� 1 �
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,可將標本放�-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性�
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋�
320U/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
160 U/L 4 號標準品 150μl �5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
80 U/L 3 號標準品 150μl �4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
40 U/L 2 號標準品 150μl �3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
20 U/L 1 號標準品 150μl �2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔�
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加�50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl�
然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度�5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻�
3. 溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30 分鐘�
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30 秒后棄去,如�
重復5 次,拍干�
6. 加酶:每孔加入酶標試�50μl,空白孔除外�
7. 溫育:操作同3�
8. 洗滌:操作同5�
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止�50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)�
11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)� 測定應在加終�
液后15 分鐘以內進行�
操作程序總結�
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品�
OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD 值計算出�
準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數�
即為樣品的實際濃度�
注意事項
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
用完,板條應裝入密封袋中保存�
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果�
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時�
控制�5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣�
4� 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD �
大于標準品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計
算時請zui后乘以總稀釋倍數�×n×5)�
5� 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�
6.底物請避光保存�
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為�.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理�
9.本試劑不同批號組分不得混用�
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準�
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃�
2.有效期�6 個月

上海恒遠生物,專業代理銷售各種elisa試劑盒,質量保證,值得信賴,如果你想了解更多試劑盒的詳細信息,來函!:,�

上海恒遠生物科技有限公司作�

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