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技�(shù)中心

香蕉苞葉花葉病毒(BBMV)酶�(lián)免疫分析 ELISA kit

2013�01�17� 14:36:55人氣�1061�(lái)源:上海裕平生物科技有限公司

資料�(lèi)�doc文件資料大小105472
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� � �上海裕平生物科技有限公司 需要積�0
�(guān) � �上海裕平生物,酶聯(lián)免疫試劑�,48T/96T,美國(guó)
【資料簡(jiǎn)介�

香蕉苞葉花葉病毒(BBMV�酶聯(lián)免疫分析�ELISA

試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

本試劑僅供研究使�目的:本試劑盒用于檢�(cè)植物組織,細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中香蕉苞葉花葉病�(BBMV�水平�

�(shí)�(yàn)原理�

  本試劑盒采用雙抗體夾心酶�(lián)免疫法(ELISA)測(cè)定標(biāo)本中香蕉苞葉花葉病毒BBMV。用純化的香蕉苞葉花葉病�(BBMV�抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中香蕉苞葉花葉病毒(BBMV�相結(jié)��(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP�(biāo)記的香蕉苞葉花葉病毒(BBMV�抗體�(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體�(fù)合物,經(jīng)�(guò)*洗滌后加底物TMB顯色�TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成�(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀�450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度�OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中香蕉苞葉花葉病毒(BBMV�的存在與否�

 

試劑盒組�

試劑盒組�

48孔配�

96孔配�

保存

�(shuō)明書(shū)

1

1

 

封板�

2片(48

2片(96

 

密封�

1�(gè)

1�(gè)

 

酶標(biāo)包被�

1×48

1×96

2-8保存

陰性對(duì)�

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8保存

�(yáng)性對(duì)�

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8保存

酶標(biāo)試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

顯色�A

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

顯色�B

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

終止�

3ml×1

6ml×1

2-8保存

濃縮洗滌�

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8保存

 

樣本處理及要�

1. 血清:室溫血液自然凝�10-20分鐘,離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出�(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心�

2. 血漿:�(yīng)根據(jù)�(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混�10-20分鐘后,離心20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心�

3. 尿液:用�(wú)菌管收集,離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照�(shí)行�

4. �(xì)胞培�(yǎng)上清:檢�(cè)分泌性的成份�(shí),用�(wú)菌管收集。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。檢�(cè)�(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBSPH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸�,細(xì)胞濃度達(dá)�100�(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出�(xì)胞內(nèi)成份。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心�

5. 組織�(biāo)本:切割�(biāo)本后,稱(chēng)取重�。加入一定量�PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保�?zhèn)�?�?biāo)本融化后仍然保持2-8的溫�。加入一定量�PBSPH7.4),用手工或勻漿器將�(biāo)本勻漿充分。離�20分鐘左右�2000-3000�(zhuǎn)/分)。仔�(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備��

6. �(biāo)本采集后盡早�(jìn)行提�,提取按相關(guān)文獻(xiàn)�(jìn)�,提取后�(yīng)盡快�(jìn)行實(shí)�(yàn)。若不能馬上�(jìn)行試�(yàn),可將標(biāo)本放�-20保存,但�(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣�,因NaN3抑制辣根�(guò)氧化物酶的(HRP)活性�

 

操作步驟�

1.         編號(hào):將樣品�(duì)�(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)�(shè)陰性對(duì)�2���(yáng)性對(duì)�2�、空白對(duì)�1孔(空白�(duì)照孔不加樣品及酶�(biāo)試劑,其余各步操作相同)

2.         加樣:分別在�、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)�50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待�(cè)樣品10μl加樣將樣品加于酶�(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃�(dòng)混勻�

3.         溫育:用封板膜封板后�37溫育30分鐘�  

4.         配液:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水�600ml后備�

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液�,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重�(fù)5�,拍��

6.         加酶:每孔加入酶�(biāo)試劑50μl,空白孔除外�

7.         溫育:操作同3�

8.         洗滌:操作同5

9.         顯色:每孔先加入顯色�A 50μl,再加入顯色�B 50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘

10.     終止:每孔加終止�50μl,終止反�(yīng)(此�(shí)�(lán)色立�(zhuǎn)黃色��

11.     �(cè)定:以空白空�(diào)��450nm波長(zhǎng)依序�(cè)量各孔的吸光度(OD值)� �(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)�(jìn)��

 

�(jié)果判定:

  試驗(yàn)有效性:�(yáng)性對(duì)照孔平均�≥1.00; 陰性對(duì)照平均�≤0.10

  臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界�=陰性對(duì)照孔平均�+0.15

  陰性判定:樣品OD< 臨界值(CUT OFF)者為香蕉苞葉花葉病毒(BBMV�陰�

  �(yáng)性判定:樣品OD臨界值(CUT OFF)者為香蕉苞葉花葉病毒(BBMV��(yáng)�

注意事項(xiàng)

1.操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)�(jìn)�,本試劑不同批號(hào)組分不得混用�

2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出�(yīng)在室溫平�15-30分鐘后方可使�,酶�(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存�

3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析�,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助�,洗滌時(shí)不影響結(jié)��

4�  封板膜只限一次性使�,以避免交叉污染�

5.底物請(qǐng)避光保存�

6.試�(yàn)�(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀�(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)�(shí),參考波�(zhǎng)�630nm

7.所有樣�,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液�2M的硫�,使用時(shí)必須注意安全�

 

保存條件及有效期

1.試劑盒保存��2-8�

2.有效期�6�(gè)�


   上海裕平生物科技有限公司主要�(jīng)�(yíng)各種品牌檔次的ELISA試劑��*,售后服�(wù)完善。并提供免費(fèi)代檢�(cè)。服�(wù)于高校及免疫�(xué)科研單位。技�(shù)人員更好的為您服�(wù)�
本公司的更多�(chǎn)�,請(qǐng)�(diǎn)擊公司:
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上海裕平生物科技有限公司作�

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