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技術中�

三葉因子3定量試劑盒說明書

2024�10�30� 14:02:21人氣�67來源�上海邦景實業有限公司

資料類型doc文件資料大小91136
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� � �上海邦景實業有限公司 需要積�0
� � �三葉因子3定量試劑�,說明�
【資料簡介�

三葉因子3定量試劑盒說明書

標本要求: 

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放�-20℃保存,但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣�,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性�

樣本處理及要求:
1.血清:全血標本請于室溫放置2小時�4℃過夜后�1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放�-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融�
2.  血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或將標本放�-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融�
3.  組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比�1g的組織樣品對�9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測�
4.  細胞培養物上清或其它生物標本�1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放�-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融�

實驗原理:

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中血清素/血清胺(ST)水平。用純化的血清素/血清胺(ST)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入血清素/血清胺(ST),再與HRP標記的血清素/血清胺(ST)抗體結合,形成抗�-抗原-酶標抗體復合物,經過�di洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶S的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血清素/血清胺(ST)呈正相關。用酶標儀�450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中血清素/血清胺(ST)濃度�

試劑盒組� :

1�30倍濃縮洗滌液 20ml×1� 7 終止� 6ml×1�

2、酶標試� 6ml×1� 8 標準品(160pg/ml� 0.5ml×1�

3、酶標包被板 12孔�8� 9 標準品稀釋液 1.5ml×1�

4、樣品稀釋液 6ml×1� 10 說明� 1�

5、顯色劑A� 6ml×1� 11 封板� 2�  

6、顯色劑B� 6ml×1/� 12 密封� 1�

試劑�特點:

1、高效、靈敏、特異的抗體;

2、穩定的重復性和可靠�;

3、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載�;

4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類�;

5、節省實驗經費�

操作步驟

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋�

80pg/ml

5號標準品

150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

40pg/ml

4號標準品

150μl�5號標準品加入150μl標準品稀釋液

20pg/ml

3號標準品

150μl�4號標準品加入150μl標準品稀釋液

10pg/ml

2號標準品

150μl�3號標準品加入150μl標準品稀釋液

5pg/ml

1號標準品

150μl�2號標準品加入150μl標準品稀釋液







2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加�50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品最終稀釋度�5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻�

3. 溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘�   

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�5次,拍干�

6. 加酶:每孔加入酶標試�50μl,空白孔除外�

7. 溫育:操作同3�

8. 洗滌:操作同5�

9. 顯色:每孔先加入顯色�A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�10分鐘.

10. 終止:每孔加終止�50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)�

11. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)� 測定應在加終止液�15分鐘以內進行�

操作程序總結�

操作程序總結.png

 

計算

  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度�

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存�

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果�

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣�

4� 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)�

5� 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�

6.底物請避光保存�

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為�.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理�

9.本試劑不同批號組分不得混用�

 

 

 

 


上海邦景實業有限公司作�

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