牛葡萄糖6磷酸脫氫酶（G6PD）elisa試劑盒技術參��

【資料簡介��

牛葡萄糖6磷酸脫氫酶（G6PD）elisa試劑��說明��

elisa試劑盒常見組成部分： 

1）酶和底物：在ELISA中zui常用的酶為HRP和ALP��

2）抗體：在ELISA中應用的抗體可分為多克隆抗體(多抗)和單克隆抗體(單抗)��

3）抗原：在ELISA中應用的抗原要求有較高的特異性、親和力和純度。主要有三類，即自然抗原、人工合成抗原和基因重組抗原��

4 人E選擇��(E-Selectin/CD62E)檢測試劑盒包被：將免疫活性物��(抗原或抗��)結合于固相載體上的過程稱為包被。常用的材料有聚苯乙烯、硝酸纖維薄膜等；常用的方法有吸附法、化學交聯法及親和素間接包被��

5）固相載體：固相載體是ELISA中用以分離結合標記物和游離標記物的主要手段，應與各種免疫活性物質有良好的結合性能并且不改變其免疫活性。常用的固相載體有聚苯乙烯塑料和硝酸纖維素膜��

牛葡萄糖6磷酸脫氫酶（G6PD）elisa試劑��樣本實驗前準備：

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等��

��1）血��

室溫血液自然凝��10-20分鐘后，離心20分鐘左右��2000-3000��/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心��

��2）血漿：

應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右��2000-3000��/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心��

��3）尿液：

用無菌管收集。離��20分鐘左右��2000-3000��/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行��

��4）細胞培養上清：

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離��20分鐘左右��2000-3000��/分）。仔細收集上清��

��5）培養細��

檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100��/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離��20分鐘左右��2000-3000��/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心��

��6）組織標��

切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試��, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離��20分鐘左右��2000-3000��/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用��

牛葡萄糖6磷酸脫氫酶（G6PD）elisa試劑��操作步驟

1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品��10孔，在di一、第二孔中分別加標準��100μl，然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各��100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別��50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各分別��50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各��50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都��50μl，濃度分別為180 ng/L��120 ng/L ��60 ng/L��30 ng/��15 ng/L）��

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣��10μl（樣品最終稀釋度��5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻��

3. 溫育：用封板膜封板后��37℃溫��30分鐘��

4. 配液：將30��48T��20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30��48T��20倍）倍稀釋后備用��

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜��30秒后棄去，如此重��5次，拍干��

6. 加酶：每孔加入酶標試��50μl，空白孔除外��

7. 溫育：操作同3��

8. 洗滌：操作同5��

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯��15分鐘.

10. 終止：每孔加終止��50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）��

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）�� 測定應在加終止液��15分鐘��

牛葡萄糖6磷酸脫氫酶（G6PD）elisa試劑��注意事項

1. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平��15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存��

2. 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果��

3. 各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制��5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣��

4. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染��

5. 底物請避光保存��

6. 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為��.

7. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理��

8. 本試劑不同批號組分不得混用��

9.如需代測或者樣本暫時不測定，可立即低溫凍存，溫度越低越好，中間避免反復凍融��-20℃以下可保存三個月,-70℃以下可保存六個月��

10.牛葡萄糖6磷酸脫氫酶（G6PD）elisa試劑��試劑使用須知��

11.��1）請參照相關法規、文獻、MSDS等信息，理解并掌握好試劑的特性，再進行安全操作��

12.��2）通常購買試劑時一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話，更加注意其他保管和管理��

13.��3）萬一試劑操作者并非專業技術人員。必須在專業人士的指導監督下進行操作。對于使用后的廢棄物，不要或者舊的試劑，應按照相關法律法規正當處理��

14.��4）購買后，請務必確認標簽上的注意事項；做好預防顛倒，摔壞的措施和管理體制；在使用前再次確認標簽上的注意事項，做好必要的安全對策；對沒有標明其危害特性、有害特性的，也要慎重地進行操作；必須帶好防護用具，小心翼翼進行操作��