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慢病毒的濃縮與純�

2012�06�19� 10:20:31人氣�762來源�上海一基實�(yè)有限公司

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� � �上海一基實�(yè)有限公司 需要積�0
�(guān) � �慢病毒的濃縮與純�
【資料簡介�

方法一 超速離心沉淀�
1. �6個Ultra-clear SW28離心�,�70%乙醇消毒�,放在超凈工作臺中打開紫外燈繼�(xù)消毒30分鐘.
2. 每個Ultra-clear SW28離心管中加入�32ml的預(yù)先處理的病毒上清�.
3. 取一�10ml的移液管,吸取12 ml 20%的蔗糖溶�.將移液管一直插入到離心管的底部,緩慢將蔗糖溶液打�4 ml.同樣�,將剩�8 ml的蔗糖溶液分別加入到另兩個離心管�.另取一支干凈的移液�,對剩�3管進行同樣處理.
4. 用PBS�(diào)整各管的重量,使對�(yīng)的離心管之間的重量相差不超過0.1g.
5. 按次�?qū)⑺?個離心管放入Beckman SW28 超速離心轉(zhuǎn)頭中.
6. 4�,25,000 rpm. �82,700g� 離心2小時.
7. 小心將管子從�(zhuǎn)頭中取出.倒掉上清,將離心管倒扣在紙巾上放置10分鐘使剩余的上清流干.吸掉剩余的液�.在管底應(yīng)�(dāng)有可見的沉淀.
8. 每管中加�100ml 不含鈣和鎂的PBS洗下沉淀.
9. 將SW28超速離心管插入�50ml錐底離心管中,蓋上蓋子.
10. �4℃溶�2小時,每隔20分鐘輕輕震蕩.
11. 4�,500g離心1分鐘,使溶液集中于管底.
12. �200μl 移液器輕柔吹打使沉淀重懸.避免�(chǎn)生泡�.將所有管中的液體集中到一個SW28離心管中.
13. 集中后的病毒懸液分裝�50μl 每份,保存在成品管�.用碎干冰速凍后儲存在-80 �.
方法� PEG-8000濃縮�
1. 5X PEG8000+NaCl配制 稱取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解�200ml Milli-Q純水中;121攝氏� 30min 濕熱滅絕 30min;保存在4�.
2. 使用0.45μm濾頭過濾慢病毒上清液�
3. �30ml過濾后的病毒初始�,加入5X PEG-8000+NaCl母液7.5 ml�
4. �20�30min混合一�,共進行3-5次;
5. 4度放置過夜;
6. 4�,4000 g,離心 20min�
7. 吸棄上清,靜置管子1�2分鐘,吸走殘余液體�
8. 加入適量的慢病毒溶解液溶解慢病毒沉淀�
9. 集中后的病毒懸液分裝�50 μl每份,保存在成品管�.用碎干冰速凍后儲存在-80 �

上海一基實�(yè)有限公司作�

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