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技術中�

委內瑞拉馬腦脊髓炎病毒PCR檢測試劑�?技術參�(shù)

2023�02�10� 14:32:30人氣�74來源�上海谷研實業(yè)有限公司

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� � �委內瑞拉馬腦脊髓炎病毒PCR檢測試劑�, 委內瑞拉馬腦脊髓炎病毒PCR檢測試劑�, 委內瑞拉馬腦脊髓
【資料簡介�

委內瑞拉馬腦脊髓炎病毒PCR檢測試劑�說明�

�(chǎn)品特�:

 

靈敏度高:能對低拷貝或多樣性模板進行定量�

特異性強:采用熱啟動酶的激活機制,抑制非特異性擴� �

重復性好:擴增曲線重合度高,受干擾影響少�

擴增效率高:擴增曲線Ct值低,起峰快,效率高�

委內瑞拉馬腦脊髓炎病毒PCR檢測試劑�原理:

所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時�(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法�

需要自備的器材�

1.儀器:分析天平、離心機、熒� PCR 擴增儀、組織研磨器�-20 ℃冰箱、可調移液器�2 µL�20µL�200 µL�1000 µL)�

2.耗材:熒� PCR 反應管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水�1.5 mL �(jīng)焦碳酸二乙酯(DEPC)水

處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL�200 µL�1000 µL)、滅菌雙蒸水�

具有下列特點�

1.�(chǎn)品僅用于科研即開即用,用戶只需要提供樣� DNA 模板,操作簡單,定量準確快速�

2. 引物�(jīng)過優(yōu)化,特異性強。預期的 PCR �(chǎn)物長度為 560 bp�

3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳�

4. 提供陽性對照,便于分析試驗結果�

檢測方法�

1.Ⅰ法�

在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,�(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會�(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR�(chǎn)物的增加wan全同步�

定量PCR擴增熒光曲線�

PCR�(chǎn)物熔解曲線圖

2.TaqMan探針法:

探針完整時,報告基團�(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5�-3’外切酶活性將探針酶切降解,產(chǎn)品僅用于科研使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系�(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR�(chǎn)物的形成wan全同步�

委內瑞拉馬腦脊髓炎病毒PCR檢測試劑�熒光定量PCR實驗步驟�

①取凍存已裂解的細胞,室溫放�5分鐘使其wan全溶解�

②兩相分� �1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管�15秒后�15�30℃孵�2�3分鐘�4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑�60%�

③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15�30℃孵�10分鐘后,�4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊�

④RNA清洗 移去上清液,�1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml�75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后�4℃下7000rpm離心5分鐘�

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘�

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的�40μl用槍反復吹打幾次,使其wan全溶解,獲得的RNA溶液保存�-80℃待用� 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀�(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm�280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。反應五要素�

斯氏分枝桿菌PCR檢測試劑盒費用參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR �(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列� 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則�

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右�

②引物擴增跨度: �200-500bp為宜,特定條件下可擴增長�10kb的片段�

③引物堿基:G+C含量�40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出�(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避�5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列�

④避免引物內部出�(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,�(chǎn)生非特異的擴增條帶�

⑤引�3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗�

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點� 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處�

⑦引物的特異性:引物應與核酸序列�(shù)�(jù)庫的其它序列無明顯同源性�

引物量:每條引物的濃�0.1�1umol�10�100pmol,以低引物量�(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會�

 

 委內瑞拉馬腦脊髓炎病毒PCR檢測試劑�實驗注意事項�

 

1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況�

 

2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;

 

3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品�

 

4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中�

 

實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時�(jiān)測整個PCR進程�*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包�*定量和相對定量)和定性分析�

 

主要服務:DNA或RNA�*定量分析、基因表達差異分析、基因分型�

 

主要技術:引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR�

 

 

 


上海谷研實業(yè)有限公司作�

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