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�(xiàn)貨人堿性成纖維�(xì)胞生�(zhǎng)因子ELISA 檢測(cè)試劑盒六�

2012�05�30� 10:56:21人氣�448�(lái)源:上海酶聯(lián)生物研究所

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� � �上海酶聯(lián)生物研究所 需要積�0
�(guān) � �人堿性成纖維�(xì)胞生�(zhǎng)因子ELISA 檢測(cè)試劑�
【資料簡(jiǎn)介�

人堿性成纖維�(xì)胞生�(zhǎng)因子ELISA 檢測(cè)試劑盒六�
 本試劑僅供研究使�  �(biāo)本:血清或血�

試驗(yàn)原理�
 BFGF試劑盒是固相夾心法酶�(lián)免疫吸附�(shí)�(yàn)(ELISA�.已知BFGF濃度的標(biāo)�(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)�(jìn)行檢�(cè)。先將BFGF�*�(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素�(biāo)記過(guò)的HRP。再�(jīng)�(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中BFGF的濃度呈比例�(guān)系�
 
人堿性成纖維�(xì)胞生�(zhǎng)因子ELISA 檢測(cè)試劑盒六�
試劑盒內(nèi)容及其配�
試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配� 48孔配� 配制
96/48人份酶標(biāo)� 1塊板�96T� 半塊板(48T� 即用�
塑料膜板� 1� 半塊 即用�
�(biāo)�(zhǔn)品:800pg/ml 1瓶(0.6ml� 1瓶(0.3ml� 按說(shuō)明書�(jìn)行稀稀
空白�(duì)� 1瓶(1.0ml� 1瓶(0.5ml� 即用�
�(biāo)�(zhǔn)品稀釋緩沖液 1瓶(5ml� 1瓶(2.5ml� 即用�
*�(biāo)記的抗BFGF抗體 1瓶(6ml� 1瓶(3.0ml� 即用�
親和鏈酶�-HRP 1瓶(10ml� 1瓶(5.0ml� 即用�
洗滌緩沖� 1瓶(20ml� 1瓶(10ml� 按說(shuō)明書�(jìn)行稀�
人堿性成纖維�(xì)胞生�(zhǎng)因子ELISA 檢測(cè)試劑盒六�
底物A 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml� 即用�
底物B 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml� 即用�
終止� 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml� 即用�
�(biāo)本稀釋液 1瓶(12ml� 1瓶(6.0ml� 即用�

自備材料
蒸餾水�
加樣器:5ul�10ul�50ul�100ul�200�500ul�1000ul�
振蕩器及磁力攪拌器等�

安全�
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗�
�(shí)�(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品�
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份�

操作注意事項(xiàng)
試劑�(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書�(chǔ)存,使用前恢�(fù)到室溫。稀稀�(guò)后的�(biāo)�(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存�
�(shí)�(yàn)中不用的板條�(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)�
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批�(hào)的試劑不要混用。保�(zhì)前使用�
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器�
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品�
洗滌酶標(biāo)板時(shí)�(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶�(biāo)反應(yīng)孔中吸水�
底物A�(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)�(shí)間打開蓋子。底物B�(duì)光敏感,避免�(zhǎng)�(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)�(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值�
加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反�(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣�
按照�(shuō)明書中標(biāo)明的�(shí)間、加液的量及順序�(jìn)行溫育操作�

樣品收集、處理及保存方法
血�-----操作�(guò)程中避免任何�(xì)胞刺激。使用不含熱原和�(nèi)毒素的試管。收集血液后�1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離�
血�-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)�1000×g離心30分鐘去除顆粒�
�(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物�
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎�1000×g離心10分鐘,取上清�
保存------如果樣品不立即使用,�(yīng)將其分成小部�-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢�(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍�

試劑的準(zhǔn)�
�(biāo)�(zhǔn)品:�(biāo)�(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)�(yàn)�(shí)�(zhǔn)備,不能�(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)�(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中�(jìn)行:
800 pg/ml �6�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品) 原倍濃度不用稀釋直接加�50ul�
400 pg/ml �5�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品) 100ul的原倍標(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
200 pg/ml �4�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品) 100ul�5�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
100 pg/ml �3�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品) 100ul�4�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
50 pg/ml �2�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品) 100ul�3�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
25 pg/ml �1�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品) 100ul�2�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液
0 pg/ml (空白對(duì)照) 原始濃度不用稀釋直接加�50ul�

洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾�50倍稀釋�


操作步驟
使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體�(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,�(chǎn)生加樣上的誤差�
根據(jù)待測(cè)樣品�(shù)量加上標(biāo)�(zhǔn)品的�(shù)量決定所需的板條數(shù)。每�(gè)�(biāo)�(zhǔn)品和空白孔建議做�(fù)孔。每�(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用�(biāo)本稀釋液1�1稀釋后加入50ul于反�(yīng)孔內(nèi)�
加入稀釋好后的�(biāo)�(zhǔn)�50ul于反�(yīng)孔、加入待�(cè)樣品50ul于反�(yīng)孔內(nèi)。立即加�50ul�*�(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻�37℃溫�1小時(shí)�
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重�(fù)此操�3次。如果用洗板�(jī)洗滌,洗滌次�(shù)增加一次�
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫�30分鐘�
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重�(fù)此操�3次。如果用洗板�(jī)洗滌,洗滌次�(shù)增加一次�
每孔加入底物A、B�50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫�10分鐘。避免光照�
取出酶標(biāo)板,迅速加�50ul終止液,加入終止液后�(yīng)立即�(cè)定結(jié)果�
�450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值�

建議使用的實(shí)�(yàn)方案
 �(biāo)�(zhǔn)品濃度(pg/ml� 
A 800 800 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品


局�
6�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品以上的�(jié)果為非線性的,根�(jù)此標(biāo)�(zhǔn)曲線�(wú)法得到的�(jié)果�

試劑盒性能
 1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1�(hào)�(biāo)�(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與�(yù)期濃度相�(guān)系數(shù)R值為0.990�
2. 特異性:不與其它�(xì)胞因子反�(yīng)�
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系�(shù)均小�10%�

�(jié) � � � � � �
1、儀器值:于波�(zhǎng)450nm的酶�(biāo)儀上讀取各孔的OD�

2、以吸光度OD值為縱坐�(biāo)(Y),相應(yīng)的BFGF�(biāo)�(zhǔn)品濃度為橫坐�(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的BFGF含量可根�(jù)其OD值由�(biāo)�(zhǔn)曲線換算出相�(yīng)的濃度�

3、檢�(cè)值范圍:0-800pg/ml

4、敏感度� 1.0 pg/ml 受體TNFRSF�(jié)�**激�2 RIPK2ELISA試劑� 
 磷脂爬行�1 PLSCR1ELISA試劑� 
 3-羥基-3-甲基戊二�*合酶1 HMGCS1ELISA試劑� 
 嗜酸性白血球相�(guān)之RNA水解酵素家族成員12 EAR12ELISA試劑� 
 嗜酸性白血球相�(guān)之RNA水解酵素家族成員3 EAR3ELISA試劑� 
 嗜酸性白血球相�(guān)之RNA水解酵素家族成員2 EAR2ELISA試劑� 
 二氫嘧啶酶樣3 DPYSL3ELISA試劑� 
 色氨酰tRNA合成� WARSELISA試劑� 
 己糖激�3 HK3ELISA試劑� 
 血小板型磷酸果糖激� PFKPELISA試劑� 
 尿苷二磷酸葡萄糖神經(jīng)酰胺葡萄糖基�(zhuǎn)移酶 UGCGELISA試劑� 
 尿苷二磷酸葡萄糖神經(jīng)酰胺葡萄糖基�(zhuǎn)移酶 UGCGELISA試劑� 
 凋亡相關(guān)�*肽酶4 Casp4ELISA試劑� 
 吡哆�/吡哆�*6激� PDXKELISA試劑� 
 二氫嘧啶酶樣2 DPYSL2ELISA試劑� 
 血�/糖皮�(zhì)激素調(diào)節(jié)激�2 GSK2ELISA試劑� 
 絲裂原活化蛋白激酶激�6 MKK6ELISA試劑� 
 

上海酶聯(lián)生物研究所作�

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