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技術中�

現貨人補體片�3a (C3a� ELISA 檢測試劑盒南�

2012�05�28� 10:02:16人氣�279來源�上海酶聯生物研究所

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� � �上海酶聯生物研究所 需要積�0
� � � � 補體片斷3a (C3a� ELISA 檢測試劑�
【資料簡介�

人補體片�3a (C3a� ELISA 檢測試劑盒南�
 本試劑僅供研究使�    

試驗原理�
 C3a試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA�.已知C3a濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將C3a�*標記的抗體同時溫�。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏�。顏色的深淺和樣品中C3a的濃度呈比例關系�
 
 人補體片�3a (C3a� ELISA 檢測試劑盒南�試劑盒內容及其配�
試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配� 48孔配� 配制
96/48人份酶標� 1塊板�96T� 半塊板(48T� 即用�
塑料膜板� 1� 半塊 即用�
標準品:400ug/ml 1瓶(0.6ml� 1瓶(0.3ml� 按說明書進行稀稀
空白對照 1瓶(1.0ml� 1瓶(0.5ml� 即用�
標準品稀釋緩沖液 1瓶(4.0ml� 1瓶(2.0ml� 即用�
*標記的抗C3a抗體 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml� 即用�
親和鏈酶�-HRP 1瓶(8.0ml� 1瓶(4.0ml� 即用�
人補體片�3a (C3a� ELISA 檢測試劑盒南�
洗滌緩沖� 1瓶(20ml� 1瓶(10ml� 按說明書進行稀�
底物A 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml� 即用�
底物B 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml� 即用�
終止� 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml� 即用�
標本稀釋液 1瓶(12ml� 1瓶(6.0ml� 即用�

自備材料
蒸餾水�
加樣器:5ul�10ul�50ul�100ul�200ul�500ul�1000ul�
振蕩器及磁力攪拌器等�

安全�
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗�
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝��
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成��

操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲�,使用前恢復到室�。稀稀過后的標準品應丟�,不可保存�
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋�,密封保�,以免變��
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用�
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器�
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品�
洗滌酶標板時應充分拍�,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水�
底物A應揮�,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光�。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD��
加入試劑的順序應一�,以保證所有反應板孔溫育的時間一��
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作�

樣品收集、處理及保存方法
血�-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后�1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離�
血�-----EDTA、檸檬酸�、肝素血漿可用于檢測�1000×g離心30分鐘去除顆粒�
細胞上清�---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物�
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎�1000×g離心10分鐘,取上清�
保存------如果樣品不立即使�,應將其分成小部�-70 ℃保�,避免反復冷�。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解�。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍�

試劑的準�
標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲�。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行�
400 ug/ml �6號標準品� 原倍濃度不用稀釋直接加�50ul�
200 ug/ml �5號標準品� 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 ug/ml �4號標準品� 100ul�5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 ug/ml �3號標準品� 100ul�4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
25 ug/ml �2號標準品� 100ul�3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
12.5 ug/ml �1號標準品� 100ul�2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 ug/ml (空白對照) 原始濃度不用稀釋直接加�50ul�

洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾�50倍稀��


操作步驟
使用�,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡�,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差�
根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復�。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1�1稀釋后加入50ul于反應孔��
加入稀釋好后的標準�50ul于反應孔、加入待測樣�50ul于反應孔�。立即加�50ul�*標記的抗�。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻�37℃溫�1小時�
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振�30�,甩去洗滌液,用吸水紙拍�。重復此操作3�。如果用洗板機洗�,洗滌次數增加一��
每孔加入60ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫�30分鐘�
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3�。如果用洗板機洗�,洗滌次數增加一次�
每孔加入底物A、B�50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫�10分鐘。避免光��
取出酶標板,迅速加�50ul終止液,加入終止液后應立即測定結��
�450nm波長處測定各孔的OD��

建議使用的實驗方�
 標準品濃度(ug/ml� 
A 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 12.5 12.5 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品


局�
6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結��

試劑盒性能
 1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990�
2. 特異性:不與其它細胞因子反應�
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%�

� � � � � � �
1、儀器值:于波�450nm的酶標儀上讀取各孔的OD�

2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的C3a標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲�,樣品的C3a含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度�

3、檢測值范圍:0-400ug/ml

4、敏感度� 1.0 ug/ml
 絨毛�*β β-CGELISA試劑� 
 促黃體激� LHELISA試劑� 
 *� PSELISA試劑�  
 瘦素 LEPELISA試劑� 
 苗條素受� LR/Ob-RELISA試劑� 
 生長激� HGHELISA試劑� 
 紅細胞生成素 EPOELISA試劑�  
 紅細胞生成素受體 EPORELISA試劑� 
 β-微管蛋白 TUBBELISA試劑� 
 前列腺素F2α PGF2αELISA試劑�  
 總前列腺特異抗原 tPSAELISA試劑�  
 � 類免疫缺陷病毒抗� HIVELISA試劑�  
 解脲脲原體抗� UU-AbELISA試劑�  
 復合前列腺特異性抗� CPSAELISA試劑�  
 單純皰疹病毒Ⅱ型抗體 HSV�-AbELISA試劑� 
 

上海酶聯生物研究所作�

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