上海莼試生物技術有限公�作�
小鼠組蛋白H2b(histon-H2b)elisa試劑盒使用說�
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� � � | 上海莼試生物技術有限公� | 需要積� | 0 |
� � � | 試劑�,試劑�,試劑� |
- 【資料簡介�
- ELISA法是免疫診斷中的一項新技術,現已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據已經使用的結果,認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查,而且由于一天之內可以檢查幾百甚至上千份標本,因此,也適合于血清流行病學調查。本法不僅可以用來測定抗體,而且也可用于測定體液中的循環抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫學各領域的應用范圍日益擴大,可概括四個方面:
1、免疫酶染色各種細胞內成份的定位�
2、研究抗酶抗體的合成�
3、顯現微量的免疫沉淀反應�
4、定量檢測體液中抗原或抗體成份�
組成 :
試劑盒組� 48孔配� 96孔配� 保存
說明� 1� 1�
封板� 2片(48� 2片(96�
密封� 1� 1�
酶標包被� 1×48 1×96 2-8℃保�
標準� 0.3ml×6� 0.3ml×6� 2-8℃保�
標準品稀釋液 3ml×1� 6ml×1� 2-8℃保�
檢測抗體-HRP 5ml×1� 10ml×1� 2-8℃保�
顯色�A� 3ml×1� 6ml×1� 2-8℃保�
顯色�B� 3ml×1� 6ml×1� 2-8℃保�
終止� 3ml×1� 6ml×1� 2-8℃保�
20*洗滌緩沖� 25ml×1� 15ml×1� 2-8℃保�
需自備的設備及試劑�
1.450±10nm濾光片酶標儀(建議儀器使用前預熱�
2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL�2-20uL�20-200uL�200-1000uL.
3.Eppendorf 移液�.
4.蒸餾水或去離子水.
5.脫脂棉吸水紙.
6.37℃恒溫箱.
7.100ml�1000ml量筒.
8. 準備若干個標準品稀釋管.
注意事項
1.試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存。實驗操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染�
2.加樣:加樣時,要控制加樣速度,避�*孔與zui后一孔之見的時間間隔過大,否則將會導致不同的預孵育時間,從而影響實驗的準確性以及重復性;一般加樣時間控制在10分鐘內,如果樣本數量過多,可使用多道移液器�
3.孵育:樣品要在密閉的容器內進行孵育,嚴格按照說明書上規定的孵育時間和溫度進行�
4.洗滌:洗滌過程中反應孔中的殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,同時要消除板底殘留的液體和手指痕跡,避免影響zui后的酶標儀讀數�
5.反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變�(比如�10分鐘左右),如果顏色較深,請提前加入終止液終止反應�
6.建議實驗前預測樣品含量,如樣品濃度過高,應對樣品進行稀釋,計算結果時乘以相應的稀釋倍數�
7.建議使用本試劑盒時先做預實驗(即先做標準曲線,試用幾個標�),如果對本試劑盒有任何疑問,可和所購經銷商,如果因運輸過程導致試劑盒失效,可要求調換,但概不承擔產品本身以外的任何損失�
操作步驟
1. 取出試劑盒,于室�(20-25�)放置15-30分鐘。實驗過程應在室�(20-25�)內進行�
2. 取出酶標板,按照標準品的次序分別加入50μl的標準品溶液于空白微孔中�
3. 空白微孔中加�50μl的樣品,空白對照加入50μl的蒸餾水�
4. 在樣品孔中加�10μl的生物su�(不含空白對照�,切忌:生物su只加樣品孔!)
5. 在各孔中加入100μl的酶標記溶液�(不含空白對照�)
6. 將酶標板用封口膠密封后,37℃孵育反� 1小時�(在孵育箱中保持穩定的溫度與濕�)
7. 充分清洗酶標�3-5次,保持各孔有充足的水壓�(濃縮洗滌液以1�100的比例與蒸餾水稀�)
8. 酶標板洗滌后用吸水紙*拍干�
9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl�(不含空白對照�)
10. 20-25℃下避光反應15分鐘�
11.各孔加入50μl終止液,終止反應�
結果判斷
1. 30分鐘內在波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值;
2. 以OD值為縱坐標,以標準品的濃度為橫坐標,繪制曲線圖;
3. 根據樣品的OD值查找對應的濃度范圍�
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