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鹿胰島素樣生長因子結(jié)合蛋�3(IGFBP-3)elisa試劑盒實(shí)�(yàn)原理

2022�04�15� 14:32:13人氣�116來源�上海莼試生物技�(shù)有限公司

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�(guān) � �鹿胰島素樣生長因子結(jié)合蛋�3,(IGFBP-3),elisa試劑�
【資料簡介�

鹿胰島素樣生長因子結(jié)合蛋�3(IGFBP-3)elisa試劑盒說明書


ELISA法是免疫診斷中的一�(xiàng)新技�(shù),現(xiàn)已成功地�(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根�(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,�(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床�(biāo)本的檢查,而且由于一天之�(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)�,因此,也適合于血清流行病�(xué)�(diào)查。本法不僅可以用來測定抗體,而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物�(yī)�(xué)各領(lǐng)域的�(yīng)用范圍日益擴(kuò)大,可概括四�(gè)方面�


1、免疫酶染色各種�(xì)胞內(nèi)成份的定位�


2、研究抗酶抗體的合成�


3、顯�(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)�


4、定量檢測體液中抗原或抗體成份�


 組成 :


試劑盒組�      48孔配�            96孔配�            保存


說明�             1�                1�  


封板�          2片(48�          2片(96�   


密封�             1�(gè)                1�(gè)  


酶標(biāo)包被�        1×48             1×96            2-8℃保�


�(biāo)�(zhǔn)�          0.3ml×6�         0.3ml×6�         2-8℃保�


�(biāo)�(zhǔn)品稀釋液    3ml×1�           6ml×1�           2-8℃保�


檢測抗體-HRP    5ml×1�           10ml×1�          2-8℃保�


顯色劑A�      3ml×1�           6ml×1�           2-8℃保�


顯色劑B�      3ml×1�           6ml×1�           2-8℃保�


終止�          3ml×1�           6ml×1�           2-8℃保�


20*洗滌緩沖�   25ml×1�          15ml×1�          2-8℃保�



鹿胰島素樣生長因子結(jié)合蛋�3(IGFBP-3)elisa試劑盒說明書需自備的設(shè)備及試劑�


1.450±10nm濾光片酶�(biāo)儀(建議儀器使用前�(yù)熱)


2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL�2-20uL�20-200uL�200-1000uL.


3.Eppendorf 移液�.


4.蒸餾水或去離子水.


5.脫脂棉吸水紙.


6.37℃恒溫箱.


7.100ml�1000ml量筒.


8.�(zhǔn)備若干�(gè)�(biāo)�(zhǔn)品稀釋管.


 

注意事項(xiàng)


1.試劑�(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前�(dá)到室溫,使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存。實(shí)�(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染�


2.加樣:加樣�(shí),要控制加樣速度,避�*孔與zui后一孔之見的�(shí)間間隔過大,否則將會(huì)�(dǎo)致不同的�(yù)孵育�(shí)間,從而影響實(shí)�(yàn)的準(zhǔn)確性以及重�(fù)性;一般加樣時(shí)間控制在10分鐘�(nèi),如果樣本數(shù)量過多,可使用多道移液器�


3.孵育:樣品要在密閉的容器�(nèi)�(jìn)行孵育,�(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育�(shí)間和溫度�(jìn)行�


4.洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,同�(shí)要消除板底殘留的液體和手指痕跡,避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀�(shù)�


5.反應(yīng)�(shí)間的控制:加入底物后�(qǐng)定時(shí)觀察反�(yīng)孔的顏色變化(比如�10分鐘左右),如果顏色較深,�(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)�


6.建議�(shí)�(yàn)前預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高,�(yīng)�(duì)樣品�(jìn)行稀釋,�(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)�


7.建議使用本試劑盒�(shí)先做�(yù)�(shí)�(yàn)(即先做標(biāo)�(zhǔn)曲線,試用幾�(gè)�(biāo)�),如果對(duì)本試劑盒有任何疑問,可和所購經(jīng)銷商,如果因�(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效,可要求�(diào)換,但概不承�(dān)�(chǎn)品本身以外的任何損失�


 

鹿胰島素樣生長因子結(jié)合蛋�3(IGFBP-3)elisa試劑盒說明書操作步驟


1. 取出試劑盒,于室�(20-25�)放置15-30分鐘。實(shí)�(yàn)過程�(yīng)在室�(20-25�)�(nèi)�(jìn)行�


2. 取出酶標(biāo)板,按照�(biāo)�(zhǔn)品的次序分別加入50μl的標(biāo)�(zhǔn)品溶液于空白微孔中�


3. 空白微孔中加�50μl的樣品,空白�(duì)照加�50μl的蒸餾水�


4. 在樣品孔中加�10μl的生物su�(不含空白�(duì)照孔,切忌:生�su樣品孔!)


5. 在各孔中加入100μl的酶�(biāo)記溶液;(不含空白�(duì)照孔)


6. 將酶�(biāo)板用封口膠密封后�37℃孵育反�(yīng) 1小時(shí)�(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕�)


7. 充分清洗酶標(biāo)�3-5次,保持各孔有充足的水壓�(濃縮洗滌液以1�100的比例與蒸餾水稀�)


8. 酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙*拍干�


9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl�(不含空白�(duì)照孔)


10. 20-25℃下避光反應(yīng)15分鐘�


11.各孔加入50μl終止液,終止反應(yīng)�


�(jié)果判�


1. 30分鐘�(nèi)在波�450nm的酶�(biāo)儀上讀取各孔的OD值;


2. 以O(shè)D值為縱坐�(biāo),以�(biāo)�(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo),繪制曲線圖�


3. 根據(jù)樣品的OD值查找對(duì)�(yīng)的濃度范圍;


上海莼試生物技�(shù)有限公司作�

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