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駱駝β�(nèi)啡肽(β-EP)elisa試劑盒技�(shù)參數(shù)

2021�12�10� 15:43:22人氣�88來源�上海帛科生物技�(shù)有限公司

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�(guān) � �駱駝β�(nèi)啡肽(β-EP)elisa試劑�,駱駝β�(nèi)啡肽(β-EP)elisa試劑�,駱駝β�(nèi)啡肽(β
【資料簡介�

駱駝β�(nèi)啡肽(β-EP)elisa試劑盒說明書


試驗(yàn)原理�

TRH試劑盒是固相夾心法酶�(lián)免疫吸附�(shí)�(yàn)(ELISA�.已知TRH濃度的標(biāo)�(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)�(jìn)行檢測。先將TRH和生物素�(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素�(biāo)記過的HRP。再�(jīng)過溫育和洗滌,去除未�(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中TRH的濃度呈比例�(guān)系�

試劑盒內(nèi)容及其配�

試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配� 48孔配� 配制

96/48人份酶標(biāo)� 1塊板�96T� 半塊板(48T� 即用�

駱駝β�(nèi)啡肽(β-EP)elisa試劑�塑料膜板� 1� 半塊 即用�

�(biāo)�(zhǔn)品:24ng/ml 1瓶(0.6ml� 1瓶(0.3ml� 按說明書�(jìn)行稀稀

空白對照 1瓶(1.0ml� 1瓶(0.5ml� 即用�

�(biāo)�(zhǔn)品稀釋緩沖液 1瓶(5ml� 1瓶(2.5ml� 即用�

生物素標(biāo)記的抗TRH抗體 1瓶(6ml� 1瓶(3.0ml� 即用�

親和鏈酶�-HRP 1瓶(10ml� 1瓶(5.0ml� 即用�

洗滌緩沖� 1瓶(20ml� 1瓶(10ml� 按說明書�(jìn)行稀�

底物A 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml� 即用�

底物B 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml� 即用�

終止� 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml� 即用�

自備材料

1� 蒸餾水�

2� 加樣器:5ul�10ul�50ul�100ul�200�500ul�1000ul�

3� 振蕩器及磁力攪拌器等�

安全�

1� 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗�

2� �(shí)�(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品�

3� 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份�

操作注意事項(xiàng)

1� 試劑�(yīng)按標(biāo)簽說明書�(chǔ)存,使用前恢�(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)�(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存�

2� �(shí)�(yàn)中不用的板條�(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)�

3� 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保�(zhì)前使用�

4� 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器�

5� 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品�

6� 洗滌酶標(biāo)板時(shí)�(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶�(biāo)反應(yīng)孔中吸水�

7� 底物A�(yīng)揮發(fā),避免長�(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長�(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)�(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值�

8� 加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反�(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣�

9� 按照說明書中�(biāo)明的�(shí)間、加液的量及順序�(jìn)行溫育操作�

駱駝β�(nèi)啡肽(β-EP)elisa試劑�樣品收集、處理及保存方法

1� 血�-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和�(nèi)毒素的試管。收集血液后�1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離�

2� 血�-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測�1000×g離心30分鐘去除顆粒�

3� �(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物�

4� 保存------如果樣品不立即使用,�(yīng)將其分成小部�-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍�

試劑的準(zhǔn)�

1� �(biāo)�(zhǔn)品:�(biāo)�(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)�(yàn)�(shí)�(zhǔn)備,不能�(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)�(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中�(jìn)行:

24 ng/ml �6號標(biāo)�(zhǔn)品) 原倍濃度不用稀釋直接加�50ul�

12 ng/ml �5號標(biāo)�(zhǔn)品) 100ul的原倍標(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

6.0 ng/ml �4號標(biāo)�(zhǔn)品) 100ul�5號標(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

3.0 ng/ml �3號標(biāo)�(zhǔn)品) 100ul�4號標(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

1.5 ng/ml �2號標(biāo)�(zhǔn)品) 100ul�3號標(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

0.75 ng/ml �1號標(biāo)�(zhǔn)品) 100ul�2號標(biāo)�(zhǔn)品加�100ul的標(biāo)�(zhǔn)品稀釋液

0 ng/ml (空白對照) 原始濃度不用稀釋直接加�50ul�

2� 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾�50倍稀釋�

操作步驟

1� 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體�(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,�(chǎn)生加樣上的誤差�

2� 根據(jù)待測樣品�(shù)量加上標(biāo)�(zhǔn)品的�(shù)量決定所需的板條數(shù)。每�(gè)�(biāo)�(zhǔn)品和空白孔建議做�(fù)孔。每�(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔�

3� 加入稀釋好后的�(biāo)�(zhǔn)�50ul于反�(yīng)孔、加入待測樣�50ul于反�(yīng)孔內(nèi)。立即加�50ul的生物素�(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻�37℃溫�1小時(shí)�

4� 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重�(fù)此操�3次。如果用洗板�(jī)洗滌,洗滌次�(shù)增加一次�

5� 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫�30分鐘�

6� 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重�(fù)此操�3次。如果用洗板�(jī)洗滌,洗滌次�(shù)增加一次�

7� 每孔加入底物A、B�50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫�10分鐘。避免光照�

8� 取出酶標(biāo)板,迅速加�50ul終止液,加入終止液后�(yīng)立即測定�(jié)果�

9� �450nm波長處測定各孔的OD值�

建議使用的實(shí)�(yàn)方案

 �(biāo)�(zhǔn)品濃度(ng/ml� 

A 24 24 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

B 12 12 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

C 6.0 6.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

D 3.0 3.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

E 1.5 1.5 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

F 0.75 0.75 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

駱駝β�(nèi)啡肽(β-EP)elisa試劑�局�

6號標(biāo)�(zhǔn)品以上的�(jié)果為非線性的,根�(jù)此標(biāo)�(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果�

試劑盒性能

1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)�(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與�(yù)期濃度相�(guān)系數(shù)R值為0.990�

2. 特異性:不與其它�(xì)胞因子反�(yīng)�

3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系�(shù)均小�10%�

�(jié) � � � � � �

1、儀器值:于波�450nm的酶�(biāo)儀上讀取各孔的OD�

2、以吸光度OD值為縱坐�(biāo)(Y),相應(yīng)的TRH�(biāo)�(zhǔn)品濃度為橫坐�(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的TRH含量可根�(jù)其OD值由�(biāo)�(zhǔn)曲線換算出相�(yīng)的濃度�

3、檢測值范圍:0-24ng/ml

4、敏感度� 0.1 ng/ml


上海帛科生物技�(shù)有限公司作�

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