上海宇淳生物科技有限公司作�
人鉤端螺旋體IgM抗體(Lep IgM)試劑盒(ELISA�
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� � � | 上海宇淳生物科技有限公司 | 需要積� | 0 |
� � � | 人鉤端螺旋體IgM抗體,(Lep IgM�,試劑盒(ELISA�,試劑�,(ELISA� |
- 【資料簡介�
- l 本試劑盒用于體外定性檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中人鉤端螺旋�IgM抗體(Lep IgM)�
l 有效期:6個月
l 保存條件�2-8�
實驗原理試劑盒采用間接法酶聯免疫吸附試驗�ELISA)。往預先包被人鉤端螺旋體IgM抗體(Lep IgM)捕獲抗原的包被微孔�,依次加入標�、陰性和陽性對�,再加入HRP標記的檢測抗�,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人鉤端螺旋體IgM抗體(Lep IgM)呈正相關。用酶標儀�450nm 波長下測定吸光度(OD 值),判定陰陽��
樣本處理及要�
1. 血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放�2小時�4℃過�,然�1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或將上清置�-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融�
2. 血漿:�EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2-8� 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或將上清置�-20℃或-80℃保�,但應避免反復凍融�
3. 組織勻漿�用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積�PBS(一般按1:9的重量體積比,比�1g的組織樣品對�9mL�PBS,具體體積可根據實驗需要適當調�,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細�,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測�4. 細胞培養物上清或其它生物標本��1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將上清置�-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融�
注:標本溶血會影響最后檢測結�,因此溶血標本不宜進行此項檢測�
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標儀�450nm�
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL�2-20uL�20-200uL�200-1000uL
3. 37�恒溫�
4. 蒸餾水或去離子水
試劑盒組�
名稱
96孔配�
48孔配�
備注
微孔酶標�
96�
48�
�
陰性對�
0.3mL
0.3mL
�
陽性對�
0.3mL
0.3mL
�
樣本稀釋液
6mL
3mL
�
檢測抗體-HRP
10mL
5mL
�
20×洗滌緩沖�
25mL
15mL
按說明書進行稀�
底物A
6mL
3mL
�
底物B
6mL
3mL
�
終止�
6mL
3mL
�
封板�
2�
2�
�
說明�
1�
1�
�
自封�
1�
1�
�
注意事項
1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25�。使用后立即冷藏保存試劑�
2. 洗板不正確可以導致不準確的結�。在加入底物前確保盡量吸干孔內液�。溫育過程中不要讓微孔干燥掉�
3. 消除板底殘留的液體和手指�,否則影�OD值�
4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏�,已經變藍的底物液不能使��
5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果�
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照��
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條��
8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活��
9. 不能使用過期產品�
10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理�,按照規定的程序處理樣品和檢測裝��
試劑準備
試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用�
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1�20稀釋,�1�20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水�
操作步驟
1. 從室溫平�20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放�4��
2. 設置陰性對照孔、陽性對照孔和樣本孔,陰�、陽性對照孔各加50μL對照�,樣本孔中加入待測樣�50μL,空白孔不加�
3. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶�HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔�37�水浴鍋或恒溫箱溫�60min�
4. 棄去液體,吸水紙上拍�,每孔加滿洗滌液�350μL�,靜�1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍�,如此重復洗�5次(也可用洗板機洗板��
5. 每孔加入底物A�B�50μL�37�避光孵育15min�
6. 每孔加入終止�50μL�15min�,在450nm波長處測定各孔的OD��
實驗結果計算
1. 陰性對�OD值:小于0.2�
2. 陽性對�OD值:大于0.8�
3、陽性判斷(Cut-Off值):陰性對�OD�+0.25,樣�OD值大于閾�,判定為陽�,反�,為陰性�
4、重復性:板內變異系數小于15%�
5、儲藏:2-8℃避光密封保存�
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