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技術中�

大鼠過氧化物酶體增生物激活受體β(rat PPAR-β)酶聯免疫分析

2012�01�06� 09:24:18人氣�179來源�上海研鑫生物科技有限公司

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� � �大鼠過氧化物酶體增生物激活受體β(rat PPAR-β)酶聯免疫分析
【資料簡介�

大鼠過氧化物酶體增生物激活受�β�rat PPAR�β�酶聯免疫分析

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用�

藥品名稱�

通用名:大鼠過氧化物酶體增生物激活受�β�rat PPAR�β�酶聯免疫分析試劑�

使用目的�

本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿、或相關組織液中過氧化物酶體增生物激活受�β�rat PPAR�β)的含量�

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本�大鼠過氧化物酶體增生物激活受�β�rat PPAR�β�水平。用純化�大鼠過氧化物酶體增生物激活受�β�rat PPAR�β�抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中加入過氧化物酶體增生物激活受�β�rat PPAR�β�,再�HRP標記�過氧化物酶體增生物激活受�β�rat PPAR�β�抗體結合,形成抗�-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色�TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中�過氧化物酶體增生物激活受�β�rat PPAR�β�呈正相關。用酶標儀�450nm波長下測定吸光度�OD值),通過標準曲線計算樣品�大鼠過氧化物酶體增生物激活受�β�rat PPAR�β)的含量�

試劑盒組�

1

20倍濃縮洗滌液

30ml×1

7

終止�

6ml×1

2

酶標試劑

6ml×1

8

標準品(9000ng/L

0.5ml×1

3

酶標包被�

12�×8

9

標準品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明�

1

5

顯色�A

6ml×1

11

封板�

2 

6

顯色�B

6ml×1/

12

密封�

1

標本處理及要�

1.血清、血漿標本可直接測定�

2.尿液、腦脊液、腹腔液�2000-3000/分離�10分鐘后,取上清液待測�

3.不能檢測含NaN3的樣�,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的�HRP)活性�

4.采集后盡早進行實驗,若不能馬上進行試驗,可將標本放�-20保存,但應避免反復凍融�

操作步驟

1.         標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上按序設標準品�10孔,�*、第二孔中分別加標準�100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;再各�100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后,在第三孔和第四孔中先各�50μl棄掉;再各取50μl分別加到第五、第六孔中;再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各�50μl分別加到第七、第八孔中;再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中;再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各�50μl棄掉。( 稀釋后各孔加樣量都�50μl,濃 度分別為 6000 ng/L4000ng/L 2000 ng/L1000 ng/L500 ng/L)�

2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)�待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品zui終稀釋度�5倍)�加樣將樣品加于酶標板孔底部,輕輕晃動混勻�

3.         溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘�  

4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�5次,拍干�

6.         加酶:每孔加入酶標試�50μl,空白孔除外�

7.         溫育:操作同3

8.         洗滌:操作同5

9.         顯色:每孔先加入顯色�A50μl,再加入顯色�B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�15分鐘.

10.     終止:每孔加終止�50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)�

11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度�OD值)� 測定應在加終止液�15分鐘以內進行�

 

計算

  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品�OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品�OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度�

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存�

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果�

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣�

4�  請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品�*�OD值的),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數�n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數�×n×5)�

5�  嚴格按說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為�.

6.本試劑不同批號組分不得混用�

7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理�

9.底物請避光保存�

檢測范圍�

100 ng/L -8000 ng/L

規格�

96人份/

保存條件及有效期

1.試劑盒保存�2-8

2.有效期�6個月

 

上海研鑫生物科技有限公司作�

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