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技術中�

大鼠S100B蛋白(S-100B)酶聯免疫分析試劑盒使用說明�

2011�12�07� 09:31:58人氣�168來源�上海研生實業有限公司

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� � �大鼠S100B蛋白(S-100B)酶聯免疫分析試劑盒使用說明�,大鼠S100B蛋白(S-100B)酶
【資料簡介�

大鼠S100B蛋白(S-100B)酶聯免疫分析試劑盒使用說明�
本試劑盒僅供研究使用�
檢測范圍�96T
4 ng/L -120 ng/L
使用目的�
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中S100B蛋白(S-100B)含量�

實驗原理�
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠S100B蛋白(S-100B)水平。用純化的大鼠S100B蛋白(S-100B)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入S100B蛋白(S-100B),再與HRP標記的S100B蛋白(S-100B)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的S100B蛋白(S-100B)呈正相關。用酶標儀�450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠S100B蛋白(S-100B)濃度�
試劑盒組成:
1�30倍濃縮洗滌液20ml×1�7終止�6ml×1�
2、酶標試�6ml×1�8標準品(240 ng/L�0.5ml×1�
3、酶標包被板12�×8�9標準品稀釋液1.5ml×1�
4、樣品稀釋液6ml×1�10說明�1�
5、顯色劑A�6ml×1�11封板�2�
6、顯色劑B�6ml×1�12密封�1�
標本要求�
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放�-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性�
操作步驟�
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋�
120ng/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
60ng/L4號標準品150μl�5號標準品加入150μl標準品稀釋液
30ng/L3號標準品150μl�4號標準品加入150μl標準品稀釋液
15ng/L2號標準品150μl�3號標準品加入150μl標準品稀釋液
7.5ng/L1號標準品150μl�2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加�50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl(樣品zui終稀釋度�5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻�
3. 溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘�
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�5次,拍干�
6. 加酶:每孔加入酶標試�50μl,空白孔除外�
7. 溫育:操作同3�
8. 洗滌:操作同5�
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�15分鐘.
10. 終止:每孔加終止�50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)�
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)� 測定應在加終止液�15分鐘以內進行�
操作程序總結�
1.準備試劑,樣品和標準�
2.加入準備好的樣品和標準品�37℃反�30分鐘
3.洗板5次,加入酶標試劑�37℃反�30分鐘
4.洗板5次,加入顯色液A、B�37℃反�10分鐘
5.加入終止�
6.15分鐘之內度OD�
7.計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度�
注意事項�
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存�
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果�
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣�
4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品�*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數�×n×5)�
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�
6.底物請避光保存�
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為�.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理�
9.本試劑不同批號組分不得混用�
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準�
保存條件及有效期�
1.試劑盒保存�2-8℃�
2.有效期�6個月
 

上海研生實業有限公司作�

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