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羊口瘡病毒(ORFV)酶聯免疫分析試劑盒使用方法
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� � � | 羊口瘡病�,ORFV,ELISA試劑� |
- 【資料簡介�
羊口瘡病毒(ORFV)酶聯免疫分析試劑�
本試劑盒僅供研究使用�
96T
使用目的�
本試劑盒用于測定羊血清、血漿及相關液體樣本中口瘡病毒(ORFV)表達�
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中羊口瘡病毒(ORFV)表達。用純化的羊口瘡病毒(ORFV)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中口瘡病毒(ORFV)相結合,經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的口瘡病毒(ORFV)抗體結合,形成抗�-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。用酶標儀�450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中羊口瘡病毒(ORFV)的存在與否�
試劑盒組�標本要求
.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放�-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性�
羊口瘡病毒(ORFV)酶聯免疫分析試劑�操作步驟
.編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對�2孔、陽性對�2孔、空白對照孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同�
2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對�50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�0μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3.溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘�
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�5次,拍干�
6.加酶:每孔加入酶標試�50μl,空白孔除外�
7.溫育:操作同3�
8.洗滌:操作同5�
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯�0分鐘.
0.終止:每孔加終止�50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)�
.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)� 測定應在加終止液�5分鐘以內進行�
操作程序總結�計算和結果判定:
試驗有效性:陽性對照孔平均�≥.00; 陰性對照平均�≤0.0
臨界值(CUT OFF)計算:臨界�=陰性對照孔平均�+0.5
陰性判定:樣品OD�< 臨界值(CUT OFF)者為口瘡病毒(ORFV)陰�
陽性判定:樣品OD�≥ 臨界值(CUT OFF)者為口瘡病毒(ORFV)陽�
羊口瘡病毒(ORFV)酶聯免疫分析試劑�注意事項
.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用�
2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡5-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存�
3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果�
4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染�
5.底物請避光保存�
6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液�2M的硫酸,使用時必須注意安全�
保存條件及有效期
.試劑盒保存�2-8℃�
2.有效期�6個月
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