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技術中�

雞多殺巴斯德氏菌(PM)ELISA檢測試劑� 使用說明�

2018�11�09� 08:44:16人氣�73來源�上海卡努生物科技有限公司

資料類型doc文件資料大小81408
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� � �上海卡努生物科技有限公司 需要積�0
� � �雞多殺巴斯德氏菌,PM,ELISA,試劑�,試劑
【資料簡介�

本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫學診�

雞多殺巴斯德氏菌(PM)ELISA檢測試劑�

使用說明�

檢測原理

試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被雞多殺巴斯德氏菌(PM)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入陰性對照、陽性對照、樣本、HRP標記的檢測抗體,經過溫育�*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雞多殺巴斯德氏菌(PM)呈正相關。用酶標儀�450nm 波長下測定吸光度(OD 值)�判斷樣品是否含有雞多殺巴斯德氏菌(PM)�

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后�3000轉離�10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離�

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝�3000轉離�30分鐘取上清�

3.  細胞上清液:3000轉離�10分鐘去除顆粒和聚合物�

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎�3000轉離�10分鐘取上清�

5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存�-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍�

自備物品

  1. 酶標儀�450nm�
  2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL�2-20uL�20-200uL�200-1000uL
  3. 37恒溫�

操作注意事項

  1.   試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平�20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現象,水浴加熱使結�*溶解后再使用�
  2.   實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存�
  3.   預處理后的樣本無需稀釋,直接�10μL加樣即可�
  4.   嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作�
  5.   所有液體組分使用前充分搖勻�

試劑盒組�

名稱

96孔配�

48孔配�

備注

微孔酶標�

96

48

陰性對�

0.3mL

0.3mL

陽性對�

0.3mL

0.3mL

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖�

25mL

15mL

按說明書進行稀�

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止�

6mL

3mL

封板�

2

2

說明�

1

1

自封�

1

1

 

試劑的準�

 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1�20稀釋,�1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水�

 

洗板方法

  1.   手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次�
  2.   自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸�1min,洗�5次�

操作步驟

  1. 從室溫平�20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放�4℃�
  2. 設置陰、陽性對照孔和樣本孔,陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL�
  3. 待測樣本孔先加待測樣�10μL,再加樣本稀釋液40μL�
  4. 隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔�37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min�
  5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)�
  6. 每孔加入底物A、B�50μL�37℃避光孵�15min�
  7. 每孔加入終止�50μL�15min內,�450nm波長處測定各孔的OD值�

結果判斷

1.  試驗有效性:陽性對照孔OD值平均�≥1.00�

               陰性對照孔OD值平均�≤0.15�

2.  臨界值(Cut off)計算:臨界�=陰性對照孔平均�+0.15

3.  陰性判斷:樣品OD值<臨界值(Cut off),樣品為陰�

4.  陽性判斷:樣品OD值>臨界值(Cut off),樣品為陽�

試劑盒性能

  1. 準確性:陽性對照孔OD值平均�≥1.00;陰性對照孔OD值平均�≤0.15,說明試驗結果有效�
  2. 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應�
  3. 重復性:板內、板間變異系數均小于15%�
  4. 貯藏�2-8℃,避光防潮保存�
  5. 有效期:6個月

免責聲明

1.   試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責�

2.   嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔�

上海卡努生物科技有限公司作�

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