上海卡努生物科技有限公司作�
人乙型肝炎病毒抗體(HBV-Ab)ELISA檢測試劑� 使用說明�
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� � � | 上海卡努生物科技有限公司 | 需要積� | 0 |
� � � | 人乙型肝炎病毒抗�,HBV-Ab,ELISA,試劑�,試劑 |
- 【資料簡介�
本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫學診�
人乙型肝炎病毒抗體(HBV-Ab)ELISA檢測試劑�
使用說明�
檢測原理
試劑盒采用間接法酶聯免疫吸附試驗(ELISA�。往預先包被人乙型肝炎病毒抗體(HBV-Ab)捕獲抗原的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育�*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人乙型肝炎病毒抗體(HBV-Ab)呈正相�。用酶標儀�450nm 波長下測定吸光度(OD 值)�判斷樣品是否含有人乙型肝炎病毒抗體(HBV-Ab��
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后�3000轉離�10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離�
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝�3000轉離�30分鐘取上��
3. 細胞上清液:3000轉離�10分鐘去除顆粒和聚合物�
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎�3000轉離�10分鐘取上��
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存�-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解��
自備物品
- 酶標儀�450nm�
- 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL�2-20uL�20-200uL�200-1000uL
- 37�恒溫�
操作注意事項
- 試劑盒保存在2-8�,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F象,水浴加熱使結�*溶解后再使用�
- 實驗中不用的板條應立即放回自封袋�,密封(低溫干燥)保存�
- 預處理后的樣本無需稀�,直接取10μL加樣即可�
- 嚴格按照說明書中標明的時�、加液量及順序進行溫育操作�
- 所有液體組分使用前充分搖勻�
試劑盒組�
名稱
96孔配�
48孔配�
備注
微孔酶標�
96�
48�
�
陰性對�
0.3mL
0.3mL
�
陽性對�
0.3mL
0.3mL
�
樣本稀釋液
6mL
3mL
�
檢測抗體-HRP
10mL
5mL
�
20×洗滌緩沖�
25mL
15mL
按說明書進行稀�
底物A
6mL
3mL
�
底物B
6mL
3mL
�
終止�
6mL
3mL
�
封板�
2�
2�
�
說明�
1�
1�
�
自封�
1�
1�
�
試劑的準�
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1�20稀�,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水�
洗板方法
- 手工洗板:甩盡孔內液�,每孔加滿洗滌液,靜�1min后甩盡孔內液�,在吸水紙上拍干,如此洗�5��
- 自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸�1min,洗�5��
操作步驟
- 從室溫平�20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放�4��
- 設置陰、陽性對照孔和樣本孔,陰、陽性對照孔中加入陰性對�、陽性對照各50μL�
- 待測樣本孔先加待測樣�10μL,再加樣本稀釋液40μL�
- 隨后�、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔�37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min�
- 棄去液體,吸水紙上拍�,每孔加滿洗滌液,靜�1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍�,如此重復洗�5次(也可用洗板機洗板��
- 每孔加入底物A、B�50μL�37℃避光孵�15min�
- 每孔加入終止�50μL�15min�,在450nm波長處測定各孔的OD��
結果判斷
1. 試驗有效性:陽性對照孔OD值平均�≥1.00�
陰性對照孔OD值平均�≤0.15�
2. 臨界值(Cut off)計算:臨界�=陰性對照孔平均�+0.15
3. 陰性判斷:樣品OD值<臨界值(Cut off�,樣品為陰�
4. 陽性判斷:樣品OD值>臨界值(Cut off),樣品為陽�
試劑盒性能
- 準確性:陽性對照孔OD值平均�≥1.00;陰性對照孔OD值平均�≤0.15,說明試驗結果有��
- 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應�
- 重復性:板內、板間變異系數均小于15%�
- 貯藏�2-8�,避光防潮保��
- 有效期:6個月
免責聲明
1. 試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實�,否則所產生的一切后�,由實驗者承�,本公司概不負責�
2. 嚴格按照說明書操�,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔�
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