上海莼試生物技術有限公�作�
馬鈴薯Y病毒(PVY)酶聯免疫分析ELISA試劑盒使用方�
資料類型 | jpg文件 | 資料大小 | 46730 |
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� � � | 上海莼試生物技術有限公� | 需要積� | 0 |
� � � | 馬鈴薯Y病毒,PVY,elisa試劑� |
- 【資料簡介�
馬鈴薯Y病毒(PVY)酶聯免疫分析ELISA試劑�實驗原理�
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫法(ELISA)測定標本中馬鈴薯Y病毒(PVY�。用純化的馬鈴薯Y病毒(PVY)抗體包被微孔板,制成固相抗�,可與樣品中馬鈴薯Y病毒(PVY)相結合,經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的馬鈴薯Y病毒(PVY)抗體結�,形成抗�-抗原-酶標抗體復合�,經�*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀�450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中馬鈴薯Y病毒(PVY)的存在與否�
試劑盒組成:
試劑盒組�
48孔配�
96孔配�
保存
說明�
1�
1�
封板�
2片(48�
2片(96�
密封�
1�
1�
酶標包被�
1×48
1×96
2-8℃保�
陰性對�
0.5ml×1�
0.5ml×1�
2-8℃保�
陽性對�
0.5ml×1�
0.5ml×1�
2-8℃保�
酶標試劑
3 ml×1�
6 ml×1�
2-8℃保�
樣品稀釋液
3 ml×1�
6 ml×1�
2-8℃保�
顯色劑A�
3 ml×1�
6 ml×1�
2-8℃保�
顯色劑B�
3 ml×1�
6 ml×1�
2-8℃保�
終止�
3ml×1�
6ml×1�
2-8℃保�
濃縮洗滌�
�20ml×20倍)×1�
�20ml×30倍)×1�
2-8℃保�
馬鈴薯Y病毒(PVY)酶聯免疫分析ELISA試劑�樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝�10-20分鐘,離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心�
2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混�10-20分鐘后,離心20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離��
3. 尿液:用無菌管收�,離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上�,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行�
4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份�,用無菌管收集。離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸�,細胞濃度達�100�/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成�。離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上�。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心�
5. 組織標本:切割標本后,稱取重�。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備�。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上�。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用�
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放�-20℃保存,但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性�
操作步驟�
1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對�2�、陽性對�2�、空白對�1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對�50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3. 溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘�
4. 配液:將30�48T�20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水�600ml后備�
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液�,甩�,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�5�,拍��
6. 加酶:每孔加入酶標試�50μl,空白孔除外�
7. 溫育:操作同3�
8. 洗滌:操作同5�
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混��37℃避光顯�15分鐘
10. 終止:每孔加終止�50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色��
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)� 測定應在加終止液�15分鐘以內進行�
結果判定�
試驗有效性:陽性對照孔平均�≥1.00; 陰性對照平均�≤0.10
臨界值(CUT OFF)計算:臨界�=陰性對照孔平均�+0.15
陰性判定:樣品OD�< 臨界值(CUT OFF)者為馬鈴薯Y病毒(PVY)陰�
陽性判定:樣品OD�≥ 臨界值(CUT OFF)者為馬鈴薯Y病毒(PVY)陽�
注意事項
1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用�
2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使�,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存�
3.濃洗滌液可能會有結晶析�,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果�
4� 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污��
5.底物請避光保存�
6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為�,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
7.所有樣�,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液�2M的硫�,使用時必須注意安全�
馬鈴薯Y病毒(PVY)酶聯免疫分析ELISA試劑�保存條件及有效期
1.試劑盒保存��2-8℃�
2.有效期�6個月
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