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技術中�

人早孕因子(EPF)ELISA檢測試劑盒實驗原�

2018�09�06� 14:59:56人氣�400來源�上海一研生物科技有限公司

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� � �上海一研生物科技有限公司 需要積�0
� � �人早孕因�,EPF,elisa試劑�
【資料簡介�

人早孕因子(EPF)ELISA檢測試劑�檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人早孕因子(EPF)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育�*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人早孕因子(EPF)呈正相關。用酶標儀�450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度�

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后�3000轉離�10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離�

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝�3000轉離�30分鐘取上清�

3.  細胞上清液:3000轉離�10分鐘去除顆粒和聚合物�

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎�3000轉離�10分鐘取上清�

5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存�-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍�

自備物品

1.     酶標儀�450nm�

2.     高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL�2-20uL�20-200uL�200-1000uL

3.     37℃恒溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平�20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現象,水浴加熱使結�*溶解后再使用�

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存�

3.  預處理后的樣本無需稀釋,直接�10μL加樣即可�

4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作�

5.  所有液體組分使用前充分搖勻�

試劑盒組�

名稱

96孔配�

48孔配�

備注

微孔酶標�

12�×8�

12�×4�

標準品(400 pg/mL�

0.6mL

0.6mL

按說明書進行稀�

標準品稀釋液

6mL

3mL

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

人早孕因子(EPF)ELISA檢測試劑�20×洗滌緩沖�

25mL

15mL

按說明書進行稀�

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止�

6mL

3mL

封板�

2�

2�

說明�

1�

1�

自封�

1�

1�

注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為�400�200�100�50�25�12.5 pg/mL.

試劑的準�

 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1�20稀釋,�1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水�

洗板方法

1.  手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次�

2.  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸�1min,洗�5次�

操作步驟

1.  從室溫平�20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放�4℃�

2.  設置標準品孔、樣本孔和空白孔,空白孔什么都不加;標準品孔各加不同濃度的標準�50μL�

3.  待測樣本孔先加樣本稀釋液40μL,再加待測樣�10μL�

4.  隨后標準品孔和樣本孔中(空白孔不加)加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min�

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)�

6.  所有孔加入底物A、B�50μL�37℃避光孵�15min�

7.  所有孔加入終止�50μL�15min內,�450nm波長處測定各孔的OD值�

結果判斷

 繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值�

試劑盒性能

1.  準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9900�

2.  靈敏度:zui低檢測濃度小�1.0 pg/mL�

3.  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應�

4.  重復性:板內、板間變異系數均小于15%�

5.  貯藏�2-8℃,避光防潮保存�

6.  人早孕因子(EPF)ELISA檢測試劑�有效期:6個月

上海一研生物科技有限公司作�

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