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技術中�

人真胰島素(True Insulin)ELISA檢測試劑盒技術參�(shù)

2018�03�22� 11:23:11人氣�166來源�上海莼試生物技術有限公�

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� � �上海莼試生物技術有限公� 需要積�0
� � �人真胰島�,True Insulin,ELISA試劑�
【資料簡介�

人真胰島素(True Insulin)ELISA檢測試劑�試驗原理�
TI試劑盒是固相夾心法酶�(lián)免疫吸附實驗(ELISA�.已知TI濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將TI和標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中TI的濃度呈比例關系�
自備材料
1� 蒸餾水�
2� 加樣器:5ul�10ul�50ul�100ul�200�500ul�1000ul�
3� 振蕩器及磁力攪拌器等�
安全�
1� 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗�
2� 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品�
3� 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份�
操作注意事項
1� 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存�
2� 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質�
3� 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用�
4� 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器�
5� 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品�
6� 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水�
7� 底物A應揮�(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值�
8� 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣�
9� 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作�
人真胰島素(True Insulin)ELISA檢測試劑�樣品收集、處理及保存方法
1� 血�-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后�1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離�
2� 血�-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測�1000×g離心30分鐘去除顆粒�
3� 細胞上清�---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物�
4� 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎�1000×g離心10分鐘,取上清�
5� 保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍�
1� 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾�50倍稀釋�
操作步驟
1� 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差�
2� 根據(jù)待測樣品�(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根�(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1�1稀釋后加入50ul于反應孔內�
3� 加入稀釋好后的標準�50ul于反應孔、加入待測樣�50ul于反應孔內。立即加�50ul的標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻�37℃溫�1小時�
4� 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次�
5� 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫�30分鐘�
6� 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次�
7� 每孔加入底物A、B�50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫�10分鐘。避免光照�
8� 取出酶標板,迅速加�50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果�
9� �450nm波長處測定各孔的OD值�
局�
6號標準品以上的結果為非線性的,根�(jù)此標準曲線無法得到的結果�
試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990�
2. 特異性:不與人其它細胞因子反應�
3. 重復性:板內、板間變異系�(shù)均小�10%�
人真胰島素(True Insulin)ELISA檢測試劑�� � � � � � �
1、儀器值:于波�450nm的酶標儀上讀取各孔的OD�
2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的TI標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的TI含量可根�(jù)其OD值由標準曲線換算出濃度�
3、檢測值范圍:0-80uIU/ml
4、敏感度� 0.1 uIU/ml

上海莼試生物技術有限公�作�

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