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技術中�

大鼠高遷移率族蛋白B(HMG-B)ELISA檢測試劑盒實驗原�

2018�03�13� 12:48:30人氣�205來源�上海谷研實業有限公司

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� � �上海谷研實業有限公司 需要積�0
� � �大鼠高遷移率族蛋白B1,HMG-B1,ELISA試劑�
【資料簡介�

大鼠高遷移率族蛋白B(HMG-B)ELISA檢測試劑�試驗原理�
HMG-B試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA�.已知HMG-B濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將HMG-B和標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏�。顏色的深淺和樣品中HMG-B的濃度呈比例關系�
試劑盒內容及其配�
試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配� 48孔配� 配制
96/48人份酶標� 塊板�96T� 半塊板(48T� 即用�
塑料膜板� � 半塊 即用�
標準品:80ng/ml 瓶(0.6ml� 瓶(0.3ml� 按說明書進行稀稀
空白對照 瓶(.0ml� 瓶(0.5ml� 即用�
標準品稀釋緩沖液 瓶(5ml� 瓶(2.5ml� 即用�
標記的抗HMG-B抗體 瓶(6ml� 瓶(3.0ml� 即用�
親和鏈酶�-HRP 瓶(0ml� 瓶(5.0ml� 即用�
洗滌緩沖� 瓶(20ml� 瓶(0ml� 按說明書進行稀�
底物A 瓶(6.0ml� 瓶(3.0ml� 即用�
底物B 瓶(6.0ml� 瓶(3.0ml� 即用�
終止� 瓶(6.0ml� 瓶(3.0ml� 即用�
自備材料
� 蒸餾��
2� 加樣器:5ul�0ul�50ul�00ul�200�500ul�000ul�
3� 振蕩器及磁力攪拌器等�
安全�
� 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗�
2� 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝��
3� 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成��
操作注意事項
� 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟�,不可保��
2� 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變��
3� 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用�
4� 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器�
5� 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品�
6� 洗滌酶標板時應充分拍�,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水�
7� 底物A應揮�,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD��
8� 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣�
9� 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作�
樣品收集、處理及保存方法
� 血�-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后�000×g離心0分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離�
2� 血�-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測�000×g離心30分鐘去除顆粒�
3� 細胞上清�---000×g離心0分鐘去除顆粒和聚合物�
4� 保存------如果樣品不立即使�,應將其分成小部�-70 ℃保�,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解�。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍�
試劑的準�
� 標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲�。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行�
80 ng/ml �6號標準品� 原倍濃度不用稀釋直接加�50ul�
40 ng/ml �5號標準品� 00ul的原倍標準品加入00ul的標準品稀釋液
20 ng/ml �4號標準品� 00ul�5號標準品加入00ul的標準品稀釋液
0 ng/ml �3號標準品� 00ul�4號標準品加入00ul的標準品稀釋液
5.0 ng/ml �2號標準品� 00ul�3號標準品加入00ul的標準品稀釋液
2.5 ng/ml (號標準品) 00ul�2號標準品加入00ul的標準品稀釋液
0 ng/ml (空白對照) 原始濃度不用稀釋直接加�50ul�
2� 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾�50倍稀��
大鼠高遷移率族蛋白B(HMG-B)ELISA檢測試劑�操作步驟
� 使用�,將所有試劑充分混�。不要使液體產生大量的泡�,以免加樣時加入大量的氣�,產生加樣上的誤��
2� 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復�。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔�
3� 加入稀釋好后的標準�50ul于反應孔、加入待測樣�50ul于反應孔�。立即加�50ul的標記的抗體。蓋上膜�,輕輕振蕩混��37℃溫育小��
4� 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振�30�,甩去洗滌液,用吸水紙拍�。重復此操作3�。如果用洗板機洗�,洗滌次數增加一次�
5� 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫�30分鐘�
6� 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌�,用吸水紙拍�。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次�
7� 每孔加入底物A、B�50ul,輕輕振蕩混��37℃溫�0分鐘。避免光照�
8� 取出酶標�,迅速加�50ul終止�,加入終止液后應立即測定結果�
9� �450nm波長處測定各孔的OD值�
建議使用的實驗方�
 標準品濃度(ng/ml� 
A 80 80 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 40 40 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 20 20 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 5.0 5.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 2.5 2.5 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

局�
6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果�
試劑盒性能
. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于號標準品。稀釋度的線�。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990�
2. 特異性:不與人其它細胞因子反��
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于0%�
大鼠高遷移率族蛋白B(HMG-B)ELISA檢測試劑�� � � � � � �
、儀器值:于波�450nm的酶標儀上讀取各孔的OD�
2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的HMG-B標準品濃度為橫坐標(X�,做得相應的曲線,樣品的HMG-B含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度�
3、檢測值范圍:0-80ng/ml
4、敏感度� 0. ng/ml

上海谷研實業有限公司作�

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