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技術中�

人內皮型一氧化氮合成酶ELISA 檢測試劑盒說明書

2017�11�30� 16:36:57人氣�234來源�上海莼試生物技術有限公�

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� � �上海莼試生物技術有限公� 需要積�0
� � �人內皮型一氧化氮合成酶ELISA檢測試劑�,ELISA試劑�
【資料簡介�

人內皮型一氧化氮合成酶ELISA檢測試劑�試驗原理�
eNOS試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA�.已知eNOS濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將eNOS�*標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中eNOS的濃度呈比例關系�
試劑盒內容及其配制:
試劑盒成� 96孔配� 48孔配�
96/48人份酶標� 1塊板�96T� 半塊�48T�
塑料膜板� 1� 半塊
標準品:80umol/L 1瓶(1.0ml� 1瓶(0.5ml�
空白對照 1瓶(1.0ml� 1瓶(0.5ml�
標準品稀釋緩沖液 1瓶(8.0ml� 1瓶(4.0ml�
*標記的抗eNOS抗體 1瓶(8.0ml� 1瓶(4.0ml
親和鏈酶�-HRP 1瓶(12ml� 1瓶(6.0ml�
洗滌緩沖� 1瓶(20ml� 1瓶(10ml�
底物A 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml�
底物B 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml�
終止� 1瓶(6.0ml� 1瓶(3.0ml�
自備材料�
蒸餾水�
加樣器:5ul�10ul�50ul�100ul�200�500ul�1000ul�
振蕩器及磁力攪拌器等�
樣品收集、處理及保存方法�
血�-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后�1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離�  
血�-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測�1000×g離心30分鐘去除顆粒�
細胞上清�---1000×g離心10分鐘除顆粒和聚合物�
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎�1000×g離心10分鐘,取上清�
保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍�
人內皮型一氧化氮合成酶ELISA檢測試劑�操作注意事項�
試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存�
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質�
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用�
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器�
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品�
底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值�
加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣�
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作�
人內皮型一氧化氮合成酶ELISA 檢測試劑盒安全性:
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗�
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品�
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份�
試劑的準備:
標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行�
80 umol/L �6號標準品� 原倍濃度不用稀釋直接加�50ul� 40 umol/L �5號標準品� 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液 20 umol/L �4號標準品� 100ul�5號標準品加入100ul的標準品稀釋液 10 umol/L �3號標準品� 100ul�4號標準品加入100ul的標準品稀釋液 5.0 umol/L �2號標準品� 100ul�3號標準品加入100ul的標準品稀釋液 2.5 umol/L �1號標準品� 100ul�2號標準品加入100ul的標準品稀釋液0 umol/L (空白對照) 原始濃度不用稀釋直接加�50ul。洗滌緩沖液�50×)的稀釋:蒸餾�50倍稀釋�
試劑盒性能�
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990�
2. 特異性:不與其它細胞因子反應�
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%�  
人內皮型一氧化氮合成酶ELISA 檢測試劑盒操作步驟:
使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差�
根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔�
加入稀釋好后的標準�50ul于反應孔、加入待測樣�50ul于反應孔內。立即加�50ul�*標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻�37℃溫�45分鐘�
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次�
每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫�30分鐘�
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次�
每孔加入底物A、B�50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫�5分鐘。避免光照�
取出酶標板,迅速加�50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果�
�450nm波長處測定各孔的OD值�
人內皮型一氧化氮合成酶ELISA檢測試劑�結果判斷與分析:
1、儀器值:于波�450nm的酶標儀上讀取各孔的OD�
2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的eNOS標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的eNOS含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度, 再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度�
3、檢測值范圍:0-80umol/L
4、敏感度� 0.1 umol/L

上海莼試生物技術有限公�作�

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