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技�(shù)中心

人五-羥色胺ELISA檢測試劑盒技�(shù)參數(shù)

2017�11�09� 16:28:01人氣�189來源�上海一研生物科技有限公司

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� � �上海一研生物科技有限公司 需要積�0
�(guān) � �人五-羥色胺ELISA檢測試劑�,ELISA試劑�
【資料簡介�

人五-羥色胺ELISA檢測試劑�試驗原理�
5-HT試劑盒是固相夾心法酶�(lián)免疫吸附實驗(ELISA�.已知5-HT濃度的標(biāo)�(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先�5-HT和標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素�(biāo)記過的HRP。再�(jīng)過溫育和洗滌,去除未�(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中5-HT的濃度呈比例�(guān)系�
自備材料
蒸餾水�
加樣器:5ul�10ul�50ul�100ul�200ul�500ul�1000ul�
振蕩器及磁力攪拌器等�
 
安全�
避免直接接觸終止液和底物A、B。人�-羥色胺ELISA檢測試劑盒一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗�
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品�
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份�
 
操作注意事項
試劑�(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)�(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存�
實驗中不用的板條�(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)�
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保�(zhì)前使用�
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器�
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品�
洗滌酶標(biāo)板時�(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶�(biāo)反應(yīng)孔中吸水�
底物A�(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后�(yīng)立即讀取OD值�
加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反�(yīng)板孔溫育的時間一樣�
按照說明書中�(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作�
 
樣品收集、處理及保存方法
血�-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和�(nèi)毒素的試管。收集血液后�1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離�
血�-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測�1000×g離心30分鐘去除顆粒�
細胞上清�---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物�
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎�1000×g離心10分鐘,取上清�
保存------如果樣品不立即使用,�(yīng)將其分成小部�-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍�
 
試劑的準(zhǔn)�
�(biāo)�(zhǔn)品:�(biāo)�(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時�(zhǔn)備,不能儲存。稀釋前將標(biāo)�(zhǔn)品振蕩混勻�
洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾�50倍稀釋� 
人五-羥色胺ELISA檢測試劑�操作步驟
使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體�(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,�(chǎn)生加樣上的誤差�
根據(jù)待測樣品�(shù)量加上標(biāo)�(zhǔn)品的�(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)�(zhǔn)品和空白孔建議做�(fù)孔。每個樣品根�(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用�(biāo)本稀釋液1�1稀釋后加入50ul于反�(yīng)孔內(nèi)�
加入稀釋好后的�(biāo)�(zhǔn)�50ul于反�(yīng)孔、加入待測樣�50ul于反�(yīng)孔內(nèi)。立即加�50ul的標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻�37℃溫�1小時�
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重�(fù)此操�3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次�
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫�30分鐘�
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重�(fù)此操�3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次�
每孔加入底物A、B�50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫�10分鐘。避免光照�
取出酶標(biāo)板,迅速加�50ul終止液,加入終止液后�(yīng)立即測定�(jié)果�
�450nm波長處測定各孔的OD值�
 
局�
6號標(biāo)�(zhǔn)品以上的�(jié)果為非線性的,根�(jù)此標(biāo)�(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果�
 
試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)�(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與�(yù)期濃度相�(guān)系數(shù)R值為0.990�
2. 特異性:不與其它細胞因子反應(yīng)�
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系�(shù)均小�10%�
 
�(jié) � � � � � �
1、儀器值:于波�450nm的酶�(biāo)儀上讀取各孔的OD�
 
2、以吸光度OD值為縱坐�(biāo)(Y),相應(yīng)�5-HT�(biāo)�(zhǔn)品濃度為橫坐�(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品�5-HT含量可根�(jù)其OD值由�(biāo)�(zhǔn)曲線換算出相�(yīng)的濃度�
 
3、檢測值范圍:0-80umol/L
 
4�人五-羥色胺ELISA檢測試劑�敏感度: 0.1 umol/L

上海一研生物科技有限公司作�

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