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技術中�

人III型前膠原ELISA檢測試劑盒說明書

2017�11�09� 16:17:57人氣�113來源�上海莼試生物技術有限公�

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� � �上海莼試生物技術有限公� 需要積�0
� � �人III型前膠原ELISA檢測試劑�,ELISA試劑�
【資料簡介�

人III型前膠原ELISA檢測試劑�試驗原理�
PC-III試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA�.已知PC-III濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將PC-III�*標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗�,去除未結合的酶結合�,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏�。顏色的深淺和樣品中PC-III的濃度呈比例關系�
自備材料
蒸餾��
加樣器:5ul�10ul�50ul�100ul�200�500ul�1000ul�
振蕩器及磁力攪拌器等�
 
安全�
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗�
實驗中不要吃�、抽煙或使用化妝��
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份�
 
操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲�,使用前恢復到室�。稀稀過后的標準品應丟�,不可保存�
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋�,密封保�,以免變��
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用�
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器�
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品�
洗滌酶標板時應充分拍�,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸��
底物A應揮�(fā),避免長時間打開蓋子。人III型前膠原ELISA檢測試劑盒底物B對光敏感,避免長時間暴露于光�。避免用手接�,有�。實驗完成后應立即讀取OD值�
加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一��
按照說明書中標明的時�、加液的量及順序進行溫育操作�
 
樣品收集、處理及保存方法
血�-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后�1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離�
血�-----EDTA、檸檬酸�、肝素血漿可用于檢測�1000×g離心30分鐘去除顆粒�
細胞上清�---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物�
保存------如果樣品不立即使�,應將其分成小部�-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍�
 
試劑的準�
標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻�
洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾�50倍稀��
 
人III型前膠原ELISA檢測試劑�操作步驟
使用�,將所有試劑充分混�。不要使液體產生大量的泡�,以免加樣時加入大量的氣�,產生加樣上的誤��
根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復�。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔�
加入稀釋好后的標準�50ul于反應孔、加入待測樣�50ul于反應孔�。立即加�50ul�*標記的抗�。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻�37℃溫�1小時�
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振�30秒,甩去洗滌�,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次�
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫�30分鐘�
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振�30�,甩去洗滌液,用吸水紙拍�。重復此操作3次。如果用洗板機洗�,洗滌次數增加一��
每孔加入底物A、B�50ul,輕輕振蕩混��37℃溫�10分鐘。避免光��
取出酶標板,迅速加�50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果�
�450nm波長處測定各孔的OD��
 
局�
6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結��
 
試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990�
2. 特異性:不與其它細胞因子反應�
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%�
 
� � � � � � �
1、儀器值:于波�450nm的酶標儀上讀取各孔的OD�
 
2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的PC-III標準品濃度為橫坐標(X�,做得相應的曲線,樣品的PC-III含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度�
 
3、檢測值范圍:0-800ng/ml
 
4�人III型前膠原ELISA檢測試劑�敏感度: 1.0 ng/ml

上海莼試生物技術有限公�作�

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