上海谷研實業有限公司作�
人硫化氫(H2S)ELISA試劑盒使用說明書
資料類型 | jpg文件 | 資料大小 | 118916 |
下載次數 | 144 | 資料圖片 | 【點擊查看� |
� � � | 上海谷研實業有限公司 | 需要積� | 0 |
� � � | 人硫化氫,H2S,ELISA試劑� |
- 【資料簡介�
人硫化氫(H2S)ELISA試劑�實驗原理�
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人硫化氫(H2S)水平。用純化的人硫化氫(H2S)抗體包被微孔板,制成固相抗�,往包被單抗的微孔中依次加入硫化氫(H2S�,再與HRP標記的硫化氫(H2S)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合�,經�*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的硫化氫(H2S)呈正相�。用酶標儀�450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人硫化氫(H2S)含��
樣本處理及要求:
. 血清:室溫血液自然凝�0-20分鐘,離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心�
2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混�0-20分鐘后,離心20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離��
3. 尿液:用無菌管收�,離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行�
4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上�。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到00�/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成�。離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心�
5. 組織標本:切割標本后,稱取重�。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備�。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4�,用手工或勻漿器將標本勻漿充�。離�20分鐘左右�2000-3000�/分)。仔細收集上�。分裝后一份待檢測,其余冷凍備��
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放�-20℃保�,但應避免反復凍�.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活��
操作步驟
標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品�0�,在*、第二孔中分別加標準�00μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后�*�、第二孔中各�00μl分別加到第三孔和第四�,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混�;然后在第三孔和第四孔中先各�50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔�,再在第�、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各�50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔�,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各�50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都�50μl,濃度分別為60 pg/mL�40pg/mL �20 pg/mL�0 pg/mL�5pg/mL��
人硫化氫(H2S)ELISA試劑�加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣�0μl(樣品zui終稀釋度�5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混��
溫育:用封板膜封板后�37℃溫�30分鐘�
配液:將30�48T�20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30�48T�20倍)倍稀釋后備用�
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液�,甩�,每孔加滿洗滌液,靜�30秒后棄去,如此重�5�,拍��
加酶:每孔加入酶標試�50μl,空白孔除外�
溫育:操作同3�
洗滌:操作同5�
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混��37℃避光顯�5分鐘.
終止:每孔加終止�50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)�
測定:以空白空調��450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)� 測定應在加終止液�5分鐘以內進行�
注意事項�
試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平�5-30分鐘后方可使�,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保��
濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助�,洗滌時不影響結��
各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確�,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘�,如標本數量�,使用排槍加��
請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品�*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數�×n×5��
封板膜只限一次性使�,以避免交叉污染�
底物請避光保存�
嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為�.
人硫化氫(H2S)ELISA試劑�所有樣�,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理�
上一篇:玻璃鋼纏繞、夾砂管�
下一篇:中央空調、通風管道
- 凡本網注�"來源:環保在�"的所有作�,版權均屬于環保在線,轉載請必須注明環保在線,http://www.hezebar.com。違反者本網將追究相關法律責任�
- 企業發布的公司新聞、技術文�、資料下載等內容,如涉及侵權、違規遭投訴�,一律由發布企業自行承擔責任,本網有權刪除內容并追溯責任�
- 本網轉載并注明自其它來源的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點或證實其內容的真實�,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品來源,并自負版權等法律責��
- 如涉及作品內�、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯�,否則視為放棄相關權��