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分光光度計測量吸光度時讀數不斷變化是由哪些原因造成的?

閱讀:19853發布時間:2020-9-29

  我們在使用分光光度計測量吸光度時為什么讀數會不斷變化?是因為顯色反應還沒進行*還是什么其他原因?其實不然,靈敏度越高的儀器,表現出的吸光值漂移越大。分光光度計的設計原理和工作原理,允許吸光值在一定范圍內變化,儀器是有一定的準確度和準確度。
 
  一、樣品的稀釋濃度
 
  樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素,由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒,尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為使較大程度減少顆粒對測試結果的影響,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值在0.1-1.5A。在此范圍內,顆粒的干擾相對較小,結果穩定。從而意味著樣品的濃度不能過低,或者過高(超過光度計的測試范圍)。
 
  二、核酸本身物化性質
 
  溶解核酸的緩沖液的pH值、離子濃度等在測試時,離子濃度太高也會導致讀數漂移,因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液(如TE)可大大穩定讀數。核酸的吸光值受pH值和緩沖液離子濃度影響。只有在一定的pH值和低離子濃度的條件下(如10mMTris-HClpH8.0),才能得到精確的檢測結果。水的pH值不穩定,可能導致檢測誤差。一些緩沖液在紫外范圍內存在自身吸收,為了確保準確測量,請使用與懸浮或洗脫樣品時相同的緩沖液。
 
  三、分光光度計操作因素
 
  1、使用儀器前,使用者應該首先了解本儀器的結構和工作原理,以及各個操縱旋鈕之功能。
 
  2、儀器應放在干燥的房間內,使用時放置在堅固平穩的工作臺上,室內照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風,防止燈泡燈絲發亮不穩定。
 
  3、在未按通電源之前,應該對儀器的安全性能進行檢查,電源接線應牢固,通電也要良好,各個調節旋鈕的起始位置應該正確,然后再按通電源開關。在儀器尚未接通電源時,電表指針必須于“0”刻線上,不是這種情況可以用電表上的校正螺絲進行調節。
 
  4、若大幅度改變測試波長,需稍等片刻,等燈熱平衡后,重新校正“0”和“100”點,然后再測量。
 
  5、比色皿使用完畢后,立即用蒸餾水沖洗干凈,并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去,以防止表面光潔度被破壞,影響比色皿的透光率。

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