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凝膠色譜儀使用注意事項和凝膠色譜柱的保護及維修保養
閱讀：9 發布時間：2025-1-17
凝膠色譜技術是六十年代初發展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術，由于設備簡單、操作方便，不需要有機溶劑，對高分子物質有很高的分離效果。凝膠色譜法又稱分子排阻色譜法。凝膠色譜主要用于高聚物的相對分子質量分級分析以及相對分子質量分布測試。目前已經被生物化學、分子生物學、生物工程學、分子免疫學以及醫學等有關領域廣泛采用，不但應用于科學實驗研究，而且已經大規模地用于工業生產。 使用凝膠色譜儀的一些注意事項： 溶劑準備：使用HPLC純溶劑，如有必要，進行過濾。保證溶劑的相溶性，避免使用對不銹鋼有腐蝕性的溶劑。 溶劑脫氣：超聲脫氣。 樣品準備：過濾樣品，確保樣品中不含固體顆粒，用流動相溶解樣品。 色譜柱的保護： (1)防止氣體進入色譜柱。凝膠柱是不允許氣泡進入的，否則將會使柱效降低甚至形成微小的難以驅除的氣室。因此，為了防止氣泡進入色譜柱，一定要使用經過脫氣的流動相，并且要嚴格按照下列步驟來安裝色譜柱。a.拆卸下色譜柱入口處的密封螺絲，觀察是否有溶劑滲出；b.如有溶劑滲出，即可將色譜柱接到管路上，以避免氣泡的進入；c.如無溶劑滲出時，表明色譜柱的此端已經進去空氣了，此時，可將色譜柱的出口端接到進樣閥上，以流動相來反方向沖洗色譜柱，以便將柱內的空氣排除。以0.2ml/min的小流量來沖色譜柱，如果溶劑的流速太快或者是壓力突然的上升都將會導致柱性能的降低；d.如果流出的溶劑里不含有氣泡，說明柱內的氣體已經被排出了，再將色譜柱以正確的方向接好，這樣氣泡就進不到色譜柱里面了。 (2)色譜柱的清洗。為了不使被測物質和雜質停留在色譜柱中，在每次的樣品分析工作完成之后，都應及時地清洗色譜柱。首先要用對被測樣品洗脫能力強的溶劑來洗脫色譜柱，以分析工作中常用的反相色譜分析法為例，因其先流出的物質是極性大的物質，此時應用99%的甲醇或使用異丙純、四氫呋喃等極性稍弱的溶劑將吸附在柱內的極性小的物質洗脫下來，洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可。如果流動相是緩沖溶液，則應先用蒸餾水來沖洗色譜柱，以沖掉柱內的鹽，然后再用合適的溶劑來沖洗。 凝膠濾過色譜法(GelFiltrationChromatography)中所使用的凝膠柱常用緩沖溶液做流動相，用完之后當然要用蒸餾水來沖洗。如果是連續操作，可以將緩沖溶液置于柱內過夜，但是維持小流速(＜0.5ml/min)以防止緩沖鹽的析出，如果流動相中含有鹵化物，即使是停一夜，也必須要用蒸餾水將色譜柱沖洗干凈，以防止它們對柱體的腐蝕。 (3)色譜柱的存放。如果色譜柱暫時不用，存放時要注意以下幾點：a.幾天之內的短期放置，凝膠柱則用蒸餾水來沖洗，再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。b.如果色譜柱長期不用，僅用上述方法來處理就不行了，這時應使用色譜柱使用說明書中所指明的溶劑來充滿色譜柱，凝膠柱則不能用水了，因柱內如果有微生物的生長則會使柱效降低，此時應用0.05%的NaNs水溶液(防腐劑)來沖洗色譜柱，再將色譜柱封嚴。色譜柱長期放置時，一定要將色譜柱的兩端封嚴，以防止由于溶劑揮發而造成的柱填料干縮現象，因這可導致柱效的嚴重降低。c.色譜柱應貯存在室溫下，如果放置于0℃以下的環境里，柱內就會結冰，這也將導致柱效的降低。 (4)不要高溫使用。 (5)不要高壓沖洗柱子 對儀器的維護和保養進行記錄。 氣相色譜儀噪聲過大一些自檢方法 氣相色譜儀啟動后不久或色譜柱更換后不久，噪聲是不可避免的，這是正常現象。噪聲過大是指比正常的標準高得多的噪聲或某些不正常的突變。發現噪聲過大時，請先檢查氣相色譜儀和積分儀使用的電網電源是否有異常波動或突變，特別是在同一電網電源上接有大功率裝置時，更要注意。此外，請檢查儀器的接地是否正確并且良好。
一、改變量程范圍，噪聲的大小還是基本不變時，要考慮是否信號線的故障、放大器電路板的故障、輸出信號線的故障、積分儀的故障。
二、將火焰熄滅之后噪聲如果還是很大，要考慮從檢測器到放大器電路板這一段是否存在問題，請進行下列項目的檢查：
1、檢查檢測器的噴嘴、收集極、離子信號線插座、點火線等部分是否固定可靠，請排除接觸不良的可能。
2、檢查檢測器是否被污染，如果污染請進行清洗。
3、要考慮是極化電壓、放大器電路板、工作電源的故障。
三、將火焰熄滅之后噪聲如果降低或消失，要考慮是否檢測器本身產生過大噪聲：
1、檢查是否使用的氣體純度太低，請更換氣體或使用氣體過濾器去除氣體中的雜質。
2、檢查檢測器是否被污染，如果污染請進行清洗。
3、檢查空調器等冷暖設備的排風是否正對著氣相色譜儀，請改變風向或更換儀器的位置。
四、降低進樣口溫度后如果噪聲變小，要考慮是否進樣口有污染現象。
五、降低色譜柱溫度后如果噪聲變小，要考慮是否載氣純度不夠或色譜柱的老化不足。