人睪酮(T)ELISA試劑盒使用原理
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上海莼試生物技術有限公司
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人睪酮(T)ELISA試劑盒使用原理
檢測范圍:96T
0.4nmol/L-12nmol/L
使用目的:人睪酮T用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中睪酮(T)含量。
實驗原理
應用雙抗體夾心法測定標本中人睪酮(T)水平。用純化的人睪酮(T)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入睪酮(T),再與HRP標記的睪酮(T)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的睪酮(T)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人睪酮(T)濃度。
操作方法
1.標準品的稀釋:人睪酮T提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
12nmol/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
6nmol/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
3nmol/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
1.5nmol/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
0.75nmol/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.加樣:人睪酮T分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定:人睪酮T以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
Eugon肉湯EugonBroth250g/瓶廣泛用于微生物的培養
Eugon瓊脂EugonAgar250g/瓶廣泛用于微生物的培養
胰蛋白示磷酸鹽肉湯TryptosePhosphateBroth250g/瓶用于苛養菌的增菌和培養
小牛浸液肉湯VealInfusionBroth250g/瓶用于苛養菌的培養
小牛浸液瓊脂VealInfusionAgar250g/瓶用于苛養菌的培養
動力-硝酸鹽培養基(A法)Power-nitrateMedium250g/瓶用于細菌的動力試驗
動力-硝酸鹽培養基(B法)Power-nitrateMedium250g/瓶用于細菌的動力試驗,每200ml培養基中需添加1支甘油(甘油)
*瓊脂FerrousSulfateAgar250g/瓶用于細菌產硫化氫試驗
明膠培養基gelatinculturemedium250g/瓶用于細菌的明膠生化試驗
*發酵培養基MannitolFermentationMedium250g/瓶用于*發酵試驗
*培養基MannitolMedium250g/瓶用于*發酵試驗
醋酸鉛培養基LeadAcetateMedium250g/瓶用于細菌產硫化氫試驗,每100ml培養基中添加1支10%醋酸鉛溶液